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Removing cells from liquid nitrogen
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  1. Putcryovialstraightfromstorageandfloatinthe37篊waterbath-cautionshouldbetakenasonrareoccasionsvialscanexplodewhenheatedupduetotrappedliquidnitrogen.
  2. Inahood,usingsteriletechnique,transfer10mlsofprewarmedFCSsupplementedmediaintosterilecentrifugetubes.
  3. Assoonascellsarewarmtakethevialfromthewaterbathandcleantheoutsidethoroughlywith70%ethanol.
  4. Pipettecellsfromthecryovialandslowlydropbydroptransfertotheprepared10mlsofmedia.
  5. Spinimmediatelyat1000rpmfor5mins,lowbrakeinordertopelletthecells.
  6. Immediatelyremovethemediafrompellet.
  7. ResUSPendcellsinafresh10mlsofmediaandtransfertoaflaskandgrowinincubator.
  8. Thefollowingdaytakeoffmedia,washwithwarmsterilePBSandaddmoremedia,leavetoincubateforafurther24hours.
  9. Checkconfluenceofcellsunderthemicroscopeandsplitbytrypsinationifnecessary.

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