1.培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80%~90%汇合单层培养细胞。 2.加秋水仙素：使用最终浓度为0.02~0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6~10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6~12 小时后，再于37℃温箱继续培养6~10小时处理（加秋水仙素）。 3.采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲刷。应用此法可使90%的中期分裂细胞从瓶壁脱落，注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落影响观察。 4.离心：收集培养液，1000转/分钟离心5~10分钟。 5.低渗处理：吸除上清液、加入预温至37℃的0.075M KCl溶液，在温箱中静置20~30分钟。 6.预固定：向悬液中加新鲜1:3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打调匀，此措施能起到先使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞粘连成块。 7.固定：......阅读全文 常见微生物菌种衰退原因及预防 微生物长期受到外界的影响，遗传性状必然发生某些变异。正是由于变异的存在才使得生物向前进化。然而由于突变的存在，菌种在培养或保藏过程中，可能会出现某些优良生产性状的劣化、遗传标记丢失、典型特征改变等现象，称为菌种衰退。比如苏云金芽孢杆菌由于菌种衰退，导致其新生的菌体芽孢和伴孢晶体都比较小；保藏的 细胞培养中如何预防老化？ 防止细胞老化最主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种，特别是传代，不能等细胞太密了之后传，一般细胞建议长到70％融合度传代最完好；换培养液应该根据自己细胞消耗培养基的情况来确定是否该换。如果感觉时间不好把握的话就多培养几瓶细胞，在不同的时间换液，最后再来比较下，看什么时候换液好，得出自己的 人肺脏类器官培养在探究新冠病毒感染肺的机制的应用 引言 众所周知，新冠病毒是会引起肺部损伤的。为助力您探究其感染机制，PeproTech在此为您提供一份全面的人肺脏类器官培养方案。 肺类器官由ESCs/iPSC分化而来，hESCs体外肺分化实际上是通过加入多种细胞因子和小分 体外细胞的原代培养、传代培养、冻存和复苏-1 一、实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养， 即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及 小鼠细胞染色体制备及核型分析实验1 培养以及小鼠外周血分裂相细胞收获实验实验材料雌性小鼠7〜10周龄试剂、试剂盒完全的RPMIPHA 溶液LPSFBS肝素钠溶液秋水仙碱溶液固定剂仪器、耗材聚苯乙烯组织培养管肝素化的微量毛细分血管有盖的12mm X 75mm 无菌管锥形玻璃离心管清洁的显微镜玻片实验步骤基本方案 培养以及小鼠 人体外周血淋巴细胞培养及染色体制片 实验概要学习和掌握人体微量血液体外培养制备染色体标本的方法。实验原理人体的1ml 外周血中一般含有约1-3×106个小淋巴细胞，通常它们都处于间期的GO和G1期。在培养条件下给予药物刺激时，经过53-72小时可在培养物中获得大量的有丝分裂细胞，供染色体标本制备和分析之用。这种外周血培养方法是在1 常见微生物菌种衰退原因及预防 微生物长期受到外界的影响，遗传性状必然发生某些变异。正是由于变异的存在才使得生物向前进化。然而由于突变的存在，菌种在培养或保藏过程中，可能会出现某些优良生产性状的劣化、遗传标记丢失、典型特征改变等现象，称为菌种衰退。比如苏云金芽孢杆菌由于菌种衰退，导致其新生的菌体芽孢和伴孢晶体都比较小；保藏的沙门氏 细胞培养的注意事项（二） 13.如何选择正确的血清种类？14.可否使用与原先培养条件不同的血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。15.血清灭活是否必须？这个问题 mESCs建系 实验概要mESCs建系主要试剂细胞基础培养液、DPBS、0.25%Trypsin、0.1%明胶、兔抗鼠全血清原液、豚鼠补体、0.5%链蛋白酶、冲胚液、培养液A、mESCs培养液B主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、体视镜、注射器、镊子、虹膜剪实验材 羊膜细胞的培养（一） 实验方法原理在标准培养箱（37°C ) 中用 Leighton 塑料管培养细胞，然后用胰蛋白酶悬浮法收集细胞。实验材料羊水标本D-PBSA秋水仙酰胺胸腺嘧啶核苷溴脱氧尿核苷胰蛋白酶EDTA Histopaque-l077试剂、试剂盒完全培养液胰蛋白酶和EDTA混合 牛胚气管细胞培养常见问题及解决方案 牛胚气管细胞培养基及培养冻存条件准备：1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用 成人小肠类器官的培养与分化操作指南 2011年，Hans Clevers等首先报道了成人小肠类器官的构建方法，人小肠类器官分别具有小肠上皮组织隐窝和绒毛区域细胞的特征，小肠类器官与小肠上皮组织在细胞组成和形态结构上高度相似，并具有良好的短狀吸收和离子转运功能。人小肠类器官的培养条件与小鼠小肠类器官不同，除了加入基本生长因子外( 牛子宫内膜上皮细胞 BEND使用说明 细胞处理注意事项 1、收到细胞，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中 的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止 3-5 小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数 猪肺泡巨噬细胞的培养操作规程！ 猪肺泡巨噬细胞的培养操作规程！ 一、细胞简介 平台编号：bio-105900 规格：1ml/T75 拉丁属名：3D4/21 产品名称：3D4/21（猪肺泡巨噬细胞） 型号：HTX2097 生长特性：贴壁 组织来源：猪肺泡巨噬细胞 细胞冻存和细胞复苏的方法步骤以及细胞的运输 细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。 培养器械的清洗消毒、细胞培养用液的配制与消毒以及... 五.RPMI1640的制备与消毒：1. 溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓 培养器械的清洗消毒、细胞培养用液的配制与消毒以及... 五.RPMI1640的制备与消毒：1. 溶解、调PH值、定容：先将培养基粉剂加入培养液体积2/3的双蒸水中,并用双蒸水冲洗包装袋2-3次(冲洗液一并加入培养基中),充分搅拌至粉剂全部溶解,并按照包装说明添加一定的药品.然后用注射器向培养基中加入配制好的青链霉素液各0.5ml, 使青链霉素的浓 经培养外周血细胞的染色体制备实验 实验材料 用 Vacutainer (BectonDickinson) 或加有不含防腐剂的肝素纳.（25U ml) 的注射 器获取肝素化的全血试剂、试剂盒 完全的 RPMI 10% FBS (胎牛血清）培养基100 X 植物血凝素氨甲蝶呤 脱氧胸嘧啶核苷秋水仙素氯化钾固定剂仪器、耗材 无菌锥形聚丙烯 经培养外周血细胞的染色体制备实验 实验材料 用 Vacutainer (BectonDickinson) 或加有不含防腐剂的肝素纳.（25U ml) 的注射 器 获取肝素化的全 家蚕细胞的传代培养 实验概要熟练掌握贴壁细胞传代的培养方法。观察传代细胞贴壁、生长和繁殖过程中细胞形态的变化。实验原理离体培养的细胞群体增殖达到一定密度时，细胞的生长和分裂速度就会减慢甚至停止，如不及时分离传代培养，细胞将逐渐衰老死亡。传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或其他比例转移，接种到另一培养瓶的培养。贴壁培养 兔成骨细胞与骨髓基质干细胞混合培养的实验研究 对骨髓基质干细胞进行改造,使其在保持快速生长的同时向成骨细胞方向分化是目前国内外研究的热点。实验发现,成熟的成骨细胞可以通过细胞间的直接接触作用促进骨髓基质干细胞增殖[ 1 ] ,此外成骨细胞可产生多种生长因子促进其骨髓基质干细胞的增殖、分化[ 2 ] 。由于骨髓基质干细胞通过诱导向成骨细胞分化后, 什么是原代细胞、细胞株、细胞系？ 原代细胞(primary cell)是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进 细胞共培养与细胞混合培养有什么区别 原代细胞(primary cell) 是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代， 如何通过追踪染色体的不稳定性来观察癌细胞的进化历程 癌细胞的基因组中到处都是突变（单一核苷酸的突变），有些突变或会通过激活癌基因的表达或关闭抑癌基因的表达而诱发癌症发生，然而可以说更重要的是在更大范围内肿瘤细胞中发生着基因组的异常，比如，诸如这样的细胞包含着异常数目的染色体（非整倍性），随着肿瘤不断进化，染色体的异常也会在毗邻的癌细胞之间发生变化 细胞培养用液的配制与消毒以及细胞传代培养与复苏-2 (9)肝素溶液的配制：含有肝素的培养液可以使内皮细胞纯度提高，肝素加入全培养液中最终浓度为 50ug/ml。因为现在市售的多为肝素钠，包装为约为0.56克/瓶，配制时，可将其溶于100ml三蒸水中，定容，过夜，然后过滤除菌，分装小瓶，保存温度为­­℃。使用时，向100ml培养液中加入1ml（精确 鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)及操作规程 鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1) 细胞介绍 该细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养；传代直到衰老；在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增 鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)及操作规程 细胞介绍该细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养；传代直到衰老；在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明这些细胞是永生化而没有转化。该细胞可作为病毒增殖、重 细胞培养大攻略2 26、PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别？ PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是杂交瘤生产培养