【求助】动物组织DNA提取纯化
2021-07-24
问题描述:
想获得高纯度的组织基因组DNA用于做定量PCR。先将小鼠脚趾放入组织裂解液(10mMTris-Hcl(pH7.5),100mMNaCl,10mMEDTA,and0.5%SDSwith0.4mg/mlproteinaseK)56°过夜,买了生工的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)溶液PH8.0,接下来该怎么做呀?感谢各位老师帮忙
*请输入10-500个字符
已帮助
0人
0人
fried-shrimp
用户
你好!我今天也在提取DNA,是青虾尾部肌肉的,方法很简单,所用裂解液是TE 缓冲液,NaOH含量极高,SDS也是10%的,蛋白酶K用量为10ul,所以只用消化3h 就够了。然后把基本消化至澄清的EP管放入预冷至4℃的离心机,12000r 10min;取上清,不要取到沉淀,转移至新EP管,加入等V的 25241的抽提液,中度涡旋30s 即可,这样再12000r 10min;取上清,这一步尤其尤其尤其小心,最好用100ul的枪吸取,小心地把上清转移出来,仔细看的话,下层的蛋白或酚的交界处 会不时地往上窜,一不小心就被吸出来了。所以宁可少取,不要贪多;可能这一步只能取到300ul左右的量,但不用太在意,加入等V的冰无水乙醇后,摇一摇,立刻会看到DNA析出来了,室温放置10min 即可;下一步,既可以用枪头把DNA挑出来,单独洗涤一下,也可以13000r 离心10min,倒去乙醇,用70%乙醇洗涤2次,都可以的;最后于通风处充分晾干,加入100~200ul DEPC 水/三蒸无菌水溶解,-20℃保存。我的试剂也基本是从生工买的,混合抽提液和你一样。
已帮助
0人
0人
xuwei00
用户
展开引用fried-shrimp你好!我今天也在提取DNA,是青虾尾部肌肉的,方法很简单,所用裂解液是TE缓冲液,NaOH含量极高,SDS也是10%的,蛋白酶K用量为10ul,所以只用消化3h就够了。然后把基本消化至澄清的EP管放入预冷至4℃的离心机,12000r10min;取上清,不要取到沉淀,转移至新EP管,加入等V的25241的抽提液,中度涡旋30s即可,这样再12000r10min;取上清,这一步尤其尤其尤其小心,最好用100ul的枪吸取,小心地把上清转移出来,仔细看的话,下层的蛋白或酚的交界处会不时地往上窜,一不小心就被吸出来了。所以宁可少取,不要贪多;可能这一步只能取到300ul左右的量,但不用太在意,加入等V的冰无水乙醇后,摇一摇,立刻会看到DNA析出来了,室温放置10min即可;下一步,既可以用枪头把DNA挑出来,单独洗涤一下,也可以13000r离心10min,倒去乙醇,用70%乙醇洗涤2次,都可以的;最后于通风处充分晾干,加入100~200ulDEPC水/三蒸无菌水溶解,-20℃保存。我的试剂也基本是从生工买的,混合抽提液和你一样。......谢谢你!
已帮助
0人
0人
qiqnqiqn12345
用户
您好,我是新手,最近在在提病毒的DNA,需要把病料组织裂解后释放出病毒,可以用TE缓冲液加SDS裂解组织吗?可以的话比例是多少呢?
已帮助
0人
0人
pbao77
用户
mark
▍
相关分类
▍
相关文章
植物RNA干扰表达载体构建方法的研究
ArcicZymes ArcicZymes 合作品牌 科技 ...
联系我们_巴顿马力(BMC)集团 BUCKTON
【求助】vimentin(波形蛋白)是否可作阳性对照 论坛
【Wacker德国瓦克Silfoam SE 47 AntifoamEmulsion多用途 ...
丙二醛(MDA)的测定方法
土壤微生物的分离和纯化实验
E.coli Competent Cells DH5α
兔血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA kit_
分子实验方法6: 基因组DNA的提取 实验方法
人结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)酶联免疫(Elisa)分析试剂盒
PLASMID DNA PREPARATION.