求助:血清白蛋白和IgG的分离纯化
2021-07-29
问题描述:
我有些问题向各位请教:
①在用超滤除白蛋白,IgG中硫酸铵盐时,膜包该如何选择?选择几个?
②如用凝胶过滤来分级纯化血清中65%硫酸铵盐析出的白蛋白和纯化33%硫酸铵盐析出的IgG,其填充介质应选择什么?其洗脱缓冲液应用什么好?
下面有些关于这方面的数据,供参考:
①牛血清白蛋白:分子量:66210;分子形状:椭圆形;分子大小:
40Å*140Å;等电点:4.7;血浆中的含量:52.0g/L。
②IgG:分子量:15300;分子形状:球状;等电点:5.8—7.3;血浆中含量:2.0g/L。
③另外,我从书上看到说:凝胶过滤在分级方法中分辨率为中等,但对脱盐效果优良;流速较低,对分级每周期约≥8小时,对脱盐仅30分钟;适用于大规模纯化的最后步骤,在纯化过程的任何阶段均可进行脱盐处理,尤其适用于两种缓冲液交替时。
期待您的帮助,谢谢您。
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rockrr
用户
IgG:分子量:15300-- 153000?①在用超滤除白蛋白,IgG中硫酸铵盐时,膜包该如何选择?选择几个?总量1万毫升, 总蛋白含量2%左右, 超滤起始硫酸铵浓度低于15%, 两个中型膜包(3万-5万分子量), 作2-3次1:5-8倍稀释, 4-6小时完成.
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chromatography
用户
白蛋白可以用蓝色琼脂糖凝胶亲和一步纯化,很好用,我们都用它专门去除白蛋白,你需要我可以把材料发给你,至于IgG可以用重组蛋白A琼脂糖凝胶一步纯化,很好用,当然你也可以考虑用疏水去纯化.白蛋白也可以用镍琼脂糖凝胶柱去纯化.
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jyp_1128
用户
对不起,IgG分子量是153000,多谢rockrr了,您帮了我大忙。还有chromatography,我看了您的很多文章,很是佩服,我现在在做牛血蛋白的分离纯化,是生产规模的,每天要处理4吨的血,准备提取血红素,白蛋白,IgG3种产品,前面用盐析分级沉淀白蛋白和IgG,然后准备过一次层析柱精分离,在超滤除盐浓缩,最后在冻干成粉末。所以,关键在层析这部分,成本和得率都是我现在面临的问题,劳驾各位高手帮小弟出出主意,chromatography兄,我的邮箱是jyp_1128@eyou.com,多谢您的帮助。
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