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GFP非常适合蛋白质标记,这是其无与伦比的成功的最大原因之一。尽管它非常适合实时成像,例如,作为TP53 MITE-seq屏幕的报告器[ 3另外,其他的应用导致GFP荧光的淬灭,这使得必须使用抗GFP抗体。组织样品的冷冻保存,组织学制备和使用固定剂通常会导致GFP荧光完全或部分丢失,这使得使用抗GFP抗体对于获得可靠的结果必不可少。通过Western Blotting检测GFP标记的蛋白,并通过免疫沉淀法研究蛋白之间的相互作用,也有必要使用GFP抗体。抗GFP抗体可作为多克隆或单克隆抗体使用,适用于在Western印迹,免疫沉淀,免疫组织化学,免疫细胞化学定位和免疫吸附测定(ELISA)上检测GFP,GFP变体和GFP融合蛋白。

方法 供应商 目录编号 样品参考
芯片 英杰 A-11122 4, 5 ]
Abcam ab290 6, 7 ]
英杰 A-21311 8, 9 ]
圣克鲁斯生物技术 sc-9996 10, 11 ]
我知道了 英杰 A-11120 12, 13 ]
MilliporeSigma 11814460001 14, 15 ]
圣克鲁斯生物技术 sc-9996 16, 17 ]
Abcam ab13970 18, 19 ]
MBL国际 598 20, 21 ]
纳卡莱·特斯克(Nacalai Tesque) GF090R 22, 23 ]
细胞信号技术 2955 24, 25 ]
发展研究杂交瘤库 DSHB-GFP-12A6 26, 27 ]
基因 TA150041 28, 29 ]
Takara Bio Clontech 632593 30, 31 ]
国际卫生组织 英杰 A-11120 32, 33 ]
Abcam ab13970 34, 35 ]
MilliporeSigma 11814460001 36, 37 ]
纳卡莱·特斯克(Nacalai Tesque) 04404-84 38, 39 ]
MBL国际 598 40, 41 ]
圣克鲁斯生物技术 sc-9996 42, 43 ]
免疫组化 英杰 A-11122 44, 45 ]
Abcam ab13970 46, 47 ]
默克密理博 MAB3580 48, 49 ]
MBL国际 598 2050 ]
纳卡莱·特斯克(Nacalai Tesque) 04404-84 51, 52 ]
无IHC 英杰 A-11120 53, 54 ]
免疫组化 英杰 A-11122 55, 56 ]
Abcam ab183734 57 ]
细胞信号技术 2956 58, 59 ]
MilliporeSigma 11814460001 60, 61 ]
生物传奇 902601 62, 63 ]
知识产权 英杰 A-11120 64, 65 ]
MilliporeSigma 11814460001 66, 67 ]
圣克鲁斯生物技术 sc-9996 68, 69 ]
Abcam ab290 70, 71 ]
MBL国际 598 72, 73 ]
细胞信号技术 2956 74, 75 ]
世界银行 圣克鲁斯生物技术 sc-9996 1769 ]
MilliporeSigma 11814460001 76, 77 ]
英杰 A-11122 78, 79 ]
Abcam ab290 80, 81 ]
细胞信号技术 2956 82, 83 ]
ChromoTek GmbH 3h9 84, 85 ]
Takara Bio Clontech 632375 86, 87 ]
生物传奇 902601 88, 89 ]
MBL国际 598 90, 91 ]
蛋白质技术集团 66002-1-Ig 92, 93 ]
圣克鲁斯生物技术 sc-390394 94, 95 ]
Miltenyi Biotec 130-091-833 96, 97 ]
基因 TA150041 98, 99 ]
表2根据截至2020年1月11日对正式出版物的调查,不同免疫学方法及其参考文献(带有克隆名称或目录号,如果参考文献指出)的GFP抗体顶级供应商。出版物仅限于2014年以来的出版物。

随着抗GFP抗体的应用数量增加,提供这种试剂的供应商数量也增加了。Labome已对正式出版物进行了调查,以汇编已在正式文章中成功使用的抗GFP抗体列表(表1)。根据此调查,以下部分提供了主要供应商的列表以及对这些抗体的简短回顾。表2列出了通常用于不同方法的抗体。

一些供应商还提供抗GFP单域抗体或纳米抗体。这些抗体由单个可变抗体结构域组成,并基于衍生自骆驼科动物的单结构域抗体。这些抗体比常规抗体小得多,并且正在发现重要的用途。Caussinus E等人率先开发了deGradFP(图2),这是一种遗传编码的方法,可在任何真核系统中快速消耗目标GFP标记的蛋白质[ 100]]。该系统依赖于融合至F-box结构域的针对GFP的单结构域抗体片段(vhhGFP4)。该融合蛋白结合GFP并将其引导至蛋白酶体进行降解。当GFP标记的蛋白是功能蛋白的唯一来源时,可以分析基因功能而无需担心任何残留蛋白的干扰。Ries等人使用GFP标记的蛋白质和小的高亲和力单域抗GFP抗体,获得了用于分析微管,神经元和酵母细胞的纳米级空间分辨率[ 101 ]。Bhogaraju S等人用Chromotek的抗GFP琼脂糖珠(GFP纳米抗体/ VHH)免疫纯化了带有eGFP标签的SdeA,用于液相色谱-质谱分析[ 102]。Lundby A等人使用了来自ChromoTek的类似GFP-Trap磁珠免疫沉淀A549细胞裂解物中的GFP偶联蛋白[ 83 ]。

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