为什么提取的原代细胞总是污染
2016-10-24
问题描述：
各位大神，求指导，我最近在提取大鼠原代肝星状细胞，因为实验室地方比较小，在细胞房的缓冲间操作，也是按一般的步骤，先消毒，备皮，开腹，然后门静脉穿刺进行灌注，灌注的时间大概接近一个小时，实验用的器械也都用酒精泡一整夜才用，灌注结束后剪下肝脏，放入烧杯中消化震荡半小时，之后离心。整个操作的过程也很小心，用的东西也都高压灭菌过，但是每次提取的细胞刚开始还好，放几天就出现污染，孵箱里面的空培养液体镜下观察却没有问题，到底是哪里出了问题，求教
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东月来星
用户
实验器诫比如剪刀啥的可以高压下。我们这个做原代的都是泡玩酒精后都高压一遍在用的
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武汉原生原代
用户建议你直接买细胞做实验，这样更加节约时间，专业人做专业事。
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zhouyuzhengjj
用户东月来星实验器诫比如剪刀啥的可以高压下。我们这个做原代的都是泡玩酒精后都高压一遍在用的器械用完做完也高压的，反正还是总污染
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复原活血汤
用户展开引用zhouyuzhengjj各位大神，求指导，我最近在提取大鼠原代肝星状细胞，因为实验室地方比较小，在细胞房的缓冲间操作，也是按一般的步骤，先消毒，备皮，开腹，然后门静脉穿刺进行灌注，灌注的时间大概接近一个小时，实验用的器械也都用酒精泡一整夜才用，灌注结束后剪下肝脏，放入烧杯中消化震荡半小时，之后离心。整个操作的过程也很小心，用的东西也都高压灭菌过，但是每次提取的细胞刚开始还好，放几天就出现污染，孵箱里面的空培养液体镜下观察却没有问题，到底是哪里出了问题，求教......我建议你取组织的时候，把老鼠杀死以后，后面的步骤都在超净台里面完成，这样污染的机率小一些。
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伊者LHY
用户是不是培养箱内污染了？楼主问题解决了吗？我最近也在做原代细胞，实验室也有其他人做原代细胞，但是都以失败告终，都是因为培养过程中细胞污染了。
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defead
用户我在实验室在取原代细胞的时候所有的仪器工具耗材灭菌是必须的但我一般会加少量的Gibico双抗和ChanGEnome支原体预防剂毕竟做不到完全无菌啊
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