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Biosettia/Lenti-LTR Packaging Mix. 450 ug/Nucleic Acid Purification/LTR-PACK-450
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Biosettia/Lenti-LTR Packaging Mix. 450 ug/Nucleic Acid Purification/LTR-PACK-450
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Product Details and Specifications
Product NameLenti-LTR Packaging Mix. 450 ug
Product Catalog NumberLTR-PACK-450
Components2 Vectors. One provides HIV-1 gag, pol, rev, and tat gene products, while the other encodes vesicular stomatitis virus G (VSV-G) served as an envelope protein. LTR-PACK-450 contains 450ug of product. This packaging mix is sufficient for lentiviral preparation from 50x10-cm plates, or 300 wells of 6 plates.
Price$545 (Packaging Mix), $845 (Packaging Mix + 293T cells)
LTR typeWild-type LTR
Storage ConditionsStore at -20 degrees Celsius. All reagents are stable for 6 months when properly stored.
Shipping ConditionsOur lentiviral packaging mixes are shipped at room temperature via overnight delivery. Please note that additional shipping charges may apply.

biosttia是一家总部位于圣地亚哥的公司,提供分子生物学产品和服务,支持全球的研究人员。利用我们高效的慢病毒系统,我们协助许多学术机构、生物技术和制药公司进行基因表达和抑制相关研究。Biosettia专门从事:shRNA载体系统的基因沉默慢病毒miRNA对基因的抑制作用慢病毒miRNA的功能筛选miRLocker–慢病毒miRNA抑制慢病毒的制备慢病毒基因表达诱导多能干细胞生成核酸纯化


RNA干扰(RNAi)是有效沉默或抑制目标基因表达的过程,该过程通过双链RNA(dsRNA)使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解,或者通过小RNA(miRNA)诱导特定mRNA翻译的抑制。这篇综述将重点介绍shRNA和siRNA是如何导致蛋白质表达抑制的。通过几种蛋白的活性(下面讨论),通过短反义核酸(siRNA和shRNA序列)锁定细胞mRNA,从而实现其随后的降解。这反过来阻断了该蛋白的进一步表达/聚集,导致其水平的下降,最终实现抑制作用。[放大]图1. siRNA和shRNA结构。(A)siRNAs是短的RNA双链,在3‘端有两个碱基的游离。(B)shRNA由正义链和反义链通过环状序列隔开共同组成。(C)shRNA构建用于插入表达载体。源自[1, 2]。背景调控途径的发现和组成元件早在1984年人们就发现反义RNA能够抑制基因的表达。1993年,Nellen和Lichtenstein提出了一个模型来解释这个观察。然而,直到1998年,Fire等人发表了在线虫RNA干扰的结果,他们发现双链RNA在抑制基因表达方面实际上比单链RNA更有效。最终确定小RNA途径涉及的蛋白质组分有许多与RNA干扰途径一样。表一总结了RNA干扰机制的主要元件。它们包括锁定靶基因的双链RNA(siRNA或shRNA)、Dicer酶,Argonaute蛋白家族的蛋白质(具体来说是Ago-2)、Drosha、RISC、TRBP和PACT。


表一总结了RNA干扰机制的主要元件。它们包括锁定靶基因的双链RNA(siRNA或shRNA)、Dicer酶,Argonaute蛋白家族的蛋白质(具体来说是Ago-2)、Drosha、RISC、TRBP和PACT。术语描述siRNA小干扰(siRNA),有在3’端有两个碱基的游离,可激活RNA干扰,通过与目标mRNA互补结合序列特异性地实现mRNA降解。shRNA短发夹RNA(shRNA),包含一个环结构,可加工成siRNA,也可通过与目标mRNA互补结合序列特异性地实现靶mRNA降解.Drosha是一种核糖核酸酶III的酶,可加工细胞核中的前体-miRNA和shRNA。Dicer核糖核酸酶III酶,能够将双链RNA加工成在3‘端有两个碱基游离的20-25bp的siRNA。果蝇的Dicer-2能够剪切长的双链RNA,而Dicer-1对miRNA的加工有重要作用RISC最小RNA诱导沉默复合物(RISC)包含Argonaute蛋白和相关的siRNA。也可能包含PACT、TRBP和Dicer。需要注意的是RISC的组成尚未能得到确切的描述。TRBPDicer剪切双链RNA以及随后转运给RISC的过程中需要PACT蛋白R(PKR)-激活蛋白(PACT)。Dicer和TRBP参与双链RNA剪切相关.Argonautefamilyofproteins和单链的RNA(siRNA)共同组装形成RISC。绑定21-35个核苷酸的RNA,包括miRNA和siRNA以及相关的靶mRNA,然后通过其内切核酸酶功能发挥剪切作用。剪切作用发生在反义链(引导链)RNA的第10th和第11th个核苷酸之间。表一:RNAi机制的主要组成元件。siRNA vs. shRNA作用机制两个在RNAi途径的基因沉默中具有实质利害关系的是双链小干扰RNA(siRNA)和基于载体的短发夹RNA(shRNA)。虽然siRNA和shRNA(图1)都可用于蛋白沉默,但它们的作用机制有所不同(图2)。不管是长的双链RNA还是短的约21bp碱基对的双链都能够直接被转运到组织培养的细胞中(参见转运机制获取更多细节)。虽然有一些报道提到siRNA在转染细胞时是被转运到细胞核中的,但更普遍的看法是它们在细胞质中聚集。长的双链RNA与Dicer一起形成复合物,双链特异性的核糖核酸酶III能够将它们处理成带有两个游离碱基的长度为21-23nt的siRNA。随后这些siRNA片段与RISC结合,RISC由Argonaute-2(Ago-2)、Dicer和TAR-RNA-结合蛋白(TRBP)组成。然后RNA的两条链分开,其中一条链从复合物上分离。5"端双链稳定性最低的那条链被选择出来,稳定的并入沉默复合物中。[放大]图2. RNAi介导的基因沉默机制。在细胞核表达后,shRNA被Drosha加工然后由Exportin-5蛋白转运到细胞质中,在细胞质中它们与Dicer结合去除环状序列。在这一点上,它们与siRNA的加工方式(以短的双链形态导入细胞,然后被Dicer识别)相同。在与RISC结合并去掉其中一条RNA链后,它们识别mRNA占有互补序列,导致其降解。源自[3]。shRNA在转染/转导细胞的细胞核中的合成,形成发夹结构,茎区成对的反义和正义链与未配对的成环核苷酸连接在一起(图1b和1c)。通过与miRNA的加工相同的RNAi机制,shRNA被加工成siRNA。使用细菌或病毒载体,shRNA被导入靶细胞的细胞核内,在某些情况下,载体可以稳定地整合到基因组中。根据驱动表达的启动子的不同,shRNA可被RNA聚合酶II或者III催化转录。在被Exportin-5转运到细胞质之前,这些初始的前体结构需要首先用Drosha及其双链RNA结合伴侣DGCR8加工形成pre-shRNA。pre-shRNA随后被Dicer和TRBP/PACT酶切,去除发卡结构,产生在两个3‘末端带有两个游离碱基的20-25nt的双链siRNA。这一有活性的siRNA随后被整合到沉默复合物上去。一旦被整合到RISC后,shRNA和siRNA识别靶mRNA和降解的过程基本上是相同的。作为RISC的一部分,siRNA通过碱基互补配对以序列特异性的方式结合到靶mRNA,从而利用Ago-2的核酸酶H样活性裂解靶RNA的双链中心附近的磷酸骨架。某些生物的这个系统有一个有趣的特点,siRNA与靶mRNA的退火使siRNA作为引物,而靶mRNA作为依赖于RNA的RNA聚合酶的模板。这就合成出一个新的双链RNA,然后由Dicer酶加工,形成正反馈循环,增加了siRNA的量。应当指出的siRNA通常需要完全同源才能诱导降解。该过程图2中有阐述。人们对RISC发现靶mRNA的过程还没有很好的理解。然而,Ameres等的报告显示细胞mRNA的靶序列的亲近性影响了它的剪切。他们还指出,RISC不是作用于未折叠的RNA。他们提出了一个模型,在该模型中,RISC非特异性的方式通过随机扩散与单链RNA接触,5"末端碱基配对比3"末端更有效率。这似乎决定了RISC与靶mRNA的稳定结合。

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2019-04-01
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The laboratory experiments for the next two weeks deal with the enzyme ß-galactosidase. For these experiments, the enzyme source will be the bacterium, E 查看更多>
2018-12-08
中国微生物菌种查询网ATCC原代细胞的分离方法! 一、悬浮细胞的分离方法1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,1000rpm/分钟离心5分钟。2、去掉上清,离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。3、用培养基重悬,调整适当细胞浓度后分瓶培养。4、如选用悬液中某种细胞,可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。二、实体组织材料的分离方法(一)机械分散法1、纤维成分很少的脑组织,部分胚胎组织 查看更多>
北京裕恒丰科技有限公司在发布的#R2100大鼠表皮角质细胞-ScienCell原代细胞供应信息,浏览与#R2100大鼠表皮角质细胞-ScienCell原代细胞相关的产品或在搜索更多与#R2100大鼠表皮角质细胞-ScienCell原代细胞相关的内容。 查看更多>
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         为了更好的帮助客户提供真实的原代细胞,使用免疫荧光鉴定出提取的细胞类型,免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。 一下是赛百慷技术人员提供的免疫荧光细胞鉴定的步骤,仅做参考:      1.细胞爬片      取4片玻璃片于24孔板中,每孔加入培养基1mL,加入细胞0.02millio... 查看更多>
北京裕恒丰科技有限公司在发布的#R1540大鼠海马神经元-ScienCell原代细胞供应信息,浏览与#R1540大鼠海马神经元-ScienCell原代细胞相关的产品或在搜索更多与#R1540大鼠海马神经元-ScienCell原代细胞相关的内容。 查看更多>
ScienCell动物原代细胞,美国Sciencell动物原代细胞的分类和报价 查看更多>
简介:sciencell原代细胞,中国试剂网拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,较好的细胞售后,为老师们提供放心科研细胞。具体详情请致电咨询。详细说明:  sciencell原代细胞产品特点:sciencell原代细胞,中国试剂网拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,较好的细胞售后,为老师们提供放心科研细胞。具体详情请致电咨询。   查看更多>
2018-01-19
货号:PH-PC-300 查看更多>
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商品咨询
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
细胞很微小,接种进去,都是随机的,我们看不见。有可能两个细胞黏在一起,也有可能分离的很开。

就好像撒一撮芝麻在培养基那么大的地方上,我们不能知道它会怎么落。
求助,干细胞的原代培养 123
猫九尾dEQ4q2017-10-06
将组织从动物体内取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA) 或机械方法处理,分散成单细胞,在合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。每个实验室独有技巧,技术经验是关键。其方法几句话说不清的。你多看看有关文章,自己摸索。
细胞培养—组织块法(细胞培养,原代培养,培养瓶,培养液)] 组织块培养法1概述 组织块培养是常用的、简便易行和成功率较高的原代培养方法,即将组织剪切成小块后,接种于培养瓶。培养瓶可根据不同细胞生长的需要做适当处理。例如预先涂以胶原薄层,以利于上皮样细胞等的生长。如果原代细胞准备做组织染色、电镜等检查,可在做原代培养前先在培养瓶内放置小盖玻片,小盖玻片要清洗干净,在消毒前放置,并在放入组织块前预先用1-2滴培养液湿润瓶底,使之固定。

大家好,

最近开始练习做原代细胞培养,但是在取材的时候,用胰酶消化时发现有小团片状的絮状聚集在一起,吹打散了马上又聚集在一起,这是怎么回事呢?有人遇到过吗?求指教下

循环肿瘤细胞(CTC)检测.pdf123
beijing19822021-08-10
一、原代细胞与细胞系有什么区别?

根据传统定义,自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney,R.I.(1987).CultureofAnimalCells.AManualofBasicTechnique.(NewYork,AlanR.Liss,Inc.)].这类细胞直接从组织分离,生命周期有限,经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间,以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
细胞系是不断生长、分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。
但实际上,经过长时间、连续的传代培养后,细胞系随着代数的增加,细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群,除非细胞经过了遗传改造。
二、倍增和代数有什么区别?

倍增是培养物中细胞总数的翻倍,通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出,传代培养过程的次数,传代培养的目的,是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
三、接收到的冻存细胞该如何处理?

收到包装箱后,立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快,以避免升温。不要将细胞储存在-80℃,这样会对细胞造成不可挽回的伤害。

四、有多少经验才能开始正常人类细胞培养

推荐有经验者在无菌环境下用洁净操作台工作,如果有细胞系培养经验的话,对原代细胞的培养也是很有益处的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室,我们会为你提供帮助。请联系我们的细胞培养专家(裕恒丰科技有限公司)。
五、冻存的细胞该如何开始培养?

(1)将一管细胞从液氮罐中取出,注意保护手和眼睛。

(2)将冻存管快速的放入37℃水浴中,轻轻握住并旋转,直到管内物体完全融化。

(3)将冻存管立即从水浴中拿出,擦干,转入无菌环境。

(4)用70%的酒精冲洗冻存管,然后擦去多余酒精。

(5)打开盖子,注意手指不要碰到里面的螺纹(注意,由于冻存管有负压,开盖时可能会有少量溢出,这是正常现象)。

(6)用多聚赖氨酸(或参照说明书)包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。

(7)盖好培养瓶的盖子,轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。

(8)将培养瓶放入培养箱中(37℃,5%CO2,95%空气)

(9)放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基,以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。

六、当我第一次复苏正常人类细胞时,是否需要先离心细胞以去除二甲基亚枫吗?

第一次复苏正常人类冻存细胞时,我们不推荐离心去除二甲基亚枫。与残留的二甲基亚枫相比,离心过程对细胞的伤害更大,尤其是不适当的高速离心时。我们的经验是:如果二甲基亚枫的浓度很低,细胞不会受毒害。如果你将1ml细胞放入含15ml培养基的T-75培养瓶中,二甲基亚枫的浓度将小于0.67%,没有发现负面影响。实际上,如果细胞的接种密度为每平方厘米5000-10000个,二甲基亚枫的浓度很低。

七、细胞培养过程中,多久更换一次培养基?

这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基,许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
注意:冻存细胞复苏后,在6-16小时内更换培养基,以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。
八、我能扩增培养和再次冻存Sciencell的正常人类细胞吗?

这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞,神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞,不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等,可以扩增培养和再次冻存。然而,需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。如果你想要再次冻存细胞,请亲自咨询我们的技术支持并使用ScienCell无血清细胞冻存液(SF-CFM)和特定的无血清培养基,以获得最佳冻存效果。
九、我能长时间的冷冻保存ScienCell的原代细胞培养基吗?

我们不推荐冷冻保存培养基,高营养的培养基经过冷冻和复温后,可能导致培养基成分的不可逆降解,从而影响细胞的生长。
十、培养瓶中应该加入多少体积的培养基?

我们推荐的用量为:T-25培养瓶5ml,T-75培养瓶15ml,T-150培养瓶30ml。文章来源北京裕恒丰科技有限公司官方微信
结肠肿瘤_可以看出哪一期123
dxy_h2lc4whq2021-08-03

如题,本人在做结肠肿瘤细胞时,每次从医院拿回来的组织都只有一指甲盖大小,我是剔除肉眼可见的一些血丝之类的,然后就进行处理了,不知道这样对不对,有没有清除干净,不知道大家在做肿瘤原代时,是怎么判断那一部分是肿瘤组织,有什么建议么?大家可以分享自己的经验。

是胰蛋白酶或胶原蛋白酶吧,使组织分散成单个细胞
1,细胞已经分化但不处于生长分裂期的这个阶段称为G0期.癌细胞虽不属于分化细胞,但在密度过大,营养缺乏的条件下也可转入G0期,在一定条件下,又开始增殖.
不知道楼主明白没有,意思是说培养基上的癌细胞可能过密,导致营养缺乏,无法满足生长分裂的需要,所以进入G0期,暂时不生长分裂.
3,MHC基因位于第六号染色体上,MHC存在于人类和哺乳动物的细胞表面.根据MHC所编码的分子结构和功能不同而将其分为1,2,3类?.1,2类分子结构相似,主要功能是向T细胞呈递抗原,是被T细胞识别的重要靶分子.1类存在于除红细胞以外的机体所以细胞膜上,2类分子仅存在于成熟B细胞,一些T细胞和抗原呈递细胞膜上,3类分子不具备上述功能,属于血清蛋白.
现在楼主应该明白了,MHC是不参与抗原抗体特异性结合的,是专门用来呈递抗原的.
如题~~
关于第一问能回答的详细点么?谢谢各位大虾~~

各位专家们大家好,最近在做一些原代细胞相关实验。细胞是自己分离提取的,老板说直接用就行。我想问问大家一般都会做鉴定吗?如果做鉴定是什么方法?普通的鉴定与检测一般都会做,我想咨询的是大家有没有一整套完整的原代细胞检测及鉴定方案。小小10蚁豆敬上,求大神解答!

准备养细胞,原代培养,刚刚取下来的组织块怎么保存吗
几小时内用的可以放在冰盒里,一个月左右的可以放在-20度冰箱,更长时间的就要放-80度冰箱了。