方案12.10 富集活细胞
| 实验方法原理 | 在25ml缧口盖离心管中加人6mlFicoll-Hypaque溶液，将9ml含2×107个细胞的培养基加在上面，离心，从交界部位收集活细胞。 | ||||||||
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| 实验材料 | 细胞悬液D-PBSA 试剂、试剂盒 | Ficoll-Hypaque溶液或其他类似物 仪器、耗材 | 离心管或常规容器生长培养基注射器移液管细胞计数器离心机 实验步骤 | 1.让悬液中大的组织团块沉降。 2.把9ml的细胞悬液（细胞团尽量少）加在6ml的Ficoll（Ficoll/metrizoate调至1.077g/ml）泛酸溶液上面，此步骤应在广口、透明有盖的离心管中进行，如25ml无菌离心管或Nunclon普通容器（清澈光亮的离心管或常规容器），或Corning50ml透明的塑料管，体积应两倍于上述溶液的体积。 3.400g(在界面中间测量），离心15min。 4.小心吸去上层液体勿破坏界面。 5.用注射器（带有钝的插管或平针头）或巴斯德吸管或移液器小心收集交界面液体。 6.用培养基（如DMEM/F12,含10%胎牛血清）将混合液稀释至20ml。 7.混合液以70g离心10min。 8.去除上清液，用5ml生长培养基重悬细胞小团。 9.重复步骤7和8使细胞不含密度培养基。 10.用血球计数板或电子计数仪计数细胞。 11.接种至培养瓶中培养。 注意事项 | 使用人的或其他灵长类的材料，不要用尖针或玻璃巴氏吸管。 |
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发布于 ： 2018-08-08
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