商品信息
联系客服
郑重提醒：
无质量问题不接受退换货，下单前请仔细核对信息。
下单后请及时联系客服核对商品价格，订单生效后再付款。
| Product Name | SensoLyte ® pNPP Alkaline Phosphatase Assay Kit *Colorimetric* |
| Size | 1 kit |
| Catalog # | AS-72146 |
| US$ | $191 |
The change of alkaline phosphatase activity is involved in a variety of physiological and pathological events, such as bone development, bone-related diseases, gestation-related diseases and inflammatory bowel diseases. Alkaline phosphatase is also a popular enzyme conjugated with secondary antibody for ELISA. p-Nitrophenyl phosphate (pNPP) is proven to be an effective chromogenic substrate for alkaline phosphate. This SensoLyte® kit can be used to detect alkaline phosphatase activity in biological samples and alkaline phosphatase-based ELISA. The kit contains: pNPP chromogenic liquid substrate (absorption maximum = 405 nm upon dephosphorylation), Assay buffer, Stop solution, Alkaline phosphatase standard, mix and read assay protocol that is compatible with high throughput screening. Kit size: 500 assays | |
| Detailed Information |  Datasheet Material Safety Data Sheets (MSDS) |
| Product Citations | Oh Y, et al. (2020) Anti-Osteoporotic Effects of Antioxidant Peptides PIISVYWK and FSVVPSPK from Mytilus edulis on Ovariectomized Mice. Antioxidants. 9(9):E866. doi: 10.3390/antiox9090866.Knopp, M. et al. (2015). Amelioration of the fitness costs of antibiotic resistance due to reduced outer membrane permeability by upregulation of alternative porins MolBioEvol 32 doi:10.1093/molbev/msv195Dai, J. et al. (2014). Cabozantinib Inhibits Prostate Cancer Growth and Prevents Tumor-Induced Bone Lesions. Clin Cancer Res 20, 617.doi: 10.1158/1078-0432.CCR-13-0839.Mah, YJ. et al. (2014). The effect of epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on human alveolar bone cells both in vitro and in vivo. Archives Oral Biol 59, 539.Pauksch, L. et al. (2014). Biocompatibility of silver nanoparticles and silver ions in primary human mesenchymal stem cells and osteoblasts. Acta Biomat 10, 439.Rebollo, A. et al. (2014). Liquid fructose downregulates Sirt1 expression and activity and impairs the oxidation of fatty acids in rat and human liver cells. Biochim BiophysActa -Mol Cell Biol Lipids 1841, 514.Yamano, S. et al. (2014). The effect of a bioactive collagen membrane releasing PDGF or GDF-5 on bone regeneration. Biomat 35, 2446.Choi, B. et al. (2012). Facile surface functionalization with glycosaminoglycans by direct coating with mussel adhesive protein. Tissue Eng Part C Meth 18, 71.Kamiyama, M. et al. (2012). The establishment of a primary culture system of proximal tubule segments using specific markers from normal mouse kidneys. Intl J Mol Sci 13, 5098. doi:10.3390/ijms13045098Kim, S-M. et al. (2012).Gelatin-layered and multi-sized porous β-tricalcium phosphate for tissue engineering scaffold. Nanoscale Res Lett 7, 78. doi:10.1186/1556-276X-7-78Open AccessMartinez-Conesa, E. et al. (2012). Characterization of ocular surface epithelial and progenitor cell markers in human adipose stromal cells derived from lipoaspirates. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci 53, 513-520.Sola, A. et al. (2012). Heat treatment of Na2O-CaO-P2O5-SiO2 bioactive glasses: Densification processes and postsintering bioactivity. J Biomed Mat Res 100A, 305. doi:10.1002/jbm.a.33276Sun, J. et al. (2012). Biomimetic interpenetrating polymer network hydrogels based on methacrylated alginate and collagen for 3D pre-osteoblast spreading and osteogenic differentiation. Soft Matter 8, 2398.Sunada, K. et al. (2012). Highly efficient antiviral and antibacterial activities of solid-state cuprous compounds. J Haz Mat 235-236, 265. doi:10.1002/jbm.a.33276Thorpe, M. et al. (2012). The external mechanical environment can override the influence of local substrate in determining stem cell fate. J Biomechanics 45, 2483.Vinardell, T. et al. (2012). Hydrostatic pressure acts to stabilize a chondrogenic phenotype in porcine joint tissue derived stem cells. Euro Cells and Mat 23, 121.Williams, C. et al. (2012). A comparison of human smooth muscle and mesenchymal stem cells as potential cell sources for tissue-engineered vascular patches. Tissue Eng Part A.Abedini, S. et al. (2011). Effects of cryopreservation with a newly-developed magnetic field programmed freezer on periodontal ligament cells and pulp tissues. Cryobiol 10.1016/j.cryobiol.2011.03.001.Brammer, K. et al. (2011). Highly bioactive 8 nm hydrothermal TiO2 nanotubes elicit enhanced bone cell response. Adv Eng Mat 13, B88.Brammer, K. et al. (2011). Comparative cell behavior on carbon-coated TiO2 nanotube surfaces for osteoblasts vs. osteo-progenitor cells. Acta Biomaterialia 7, 2697.Frandsen, C. et al. (2011). Zirconium oxide nanotube surface prompts increased osteoblast functionality and mineralization. Mat Sci and Eng 31, 1716.Guller, S. et al. (2011). Protein composition of microparticles shed from human placenta during placental perfusion: Potential role in angiogenesis and fibrinolysis in preeclampsia. Placenta 32, 63.Hong, D. et al. (2011). Quantitative proteomic analysis of dexamethasone-induced effects on osteoblast differentiation, proliferation, and apoptosis in MC3T3-E1 cells using SILAC. Osteo Inter 22, 2175.Jeon, O. et al. (2011). Affinity-based growth factor delivery using biodegradable, photocrosslinked heparin-alginate hydrogels. J of Cont Rel 154, 258.Kemoun, P. et al. (2011). The role of cell surface markers and enamel matrix derivatives on human periodontal ligament mesenchymal progenitor responses in vitro. Biomat 32, 7375.Kulp, A. et al. (2011). Recognition of β-Strand motifs by RseB is required for E activity in escherichia coli. J. Bacteriol 193, 6179-6186.Lau, E. et al. (2011). Effect of low-magnitude, high-frequency vibration on osteogenic differentiation of rat mesenchymal stromal cells. J of Ortho Res 29, 1075.Lin, F. et al. (2011). Role of mitogen-activated protein kinase in osteoblast differentiation. J Ortho Res 29, 204.Manning, A. et al. (2011). Contribution of bacterial outer membrane vesicles to innate bacterial defense Biomedcentral 11, 258.McNeil, S. et al. (2011). Polycaprolactone fibres as a potential delivery system for collagen to support bone regeneration. Curr Drug Deliv 8, 448.Nazari-Shafti, T. et al. (2011). Mesenchymal stem cell derived hematopoietic cells are permissive to HIV-1 infection. Retrovirol 8, 3.Oh, P-S. et al. (2011). Schlafen-3 decreases cancer stem cell marker expression and autocrine/juxtacrine signaling in FOLFOX-resistant colon cancer cells. AJP-GI 10.1152/ajpgi.00403.Rathbone, C. et al. (2011). Effect of various concentrations of antibiotics on osteogenic cell viability and activity. J Orthopaedic Res 10.1002/jor.21343.Salerno, A. et al. (2011). Processing/structure/property relationship of multi-scaled PCL and PCLHA composite scaffolds prepared via gas foaming and NaCl reverse templating. Biotech and Bioengin 108, 963.Shah, D. et al. (2011). Cell invasion of poultry-associated Salmonella Enteritidis isolates is associated with pathogenicity, motility and secretion of type-three secretion system secreted proteins. Microbiol 10.1099/mic.0.044461-0.Tan, F. et al. (2011). Osteoconductivity and growth factor production by MG63 osteoblastic cells on bioglass-coated orthopedic implants. Biotech and Bioengin 108, 454.Wang, J. et al. (2011). The effect of scaffold architecture on odontogenic differentiation of human dental pulp stem cells. Biomaterials 32, 7822.Yamano, S. et al. (2011). Bioactive collagen membrane as a carrier for sustained release of PDGF. J Tis Sci Eng 2, 4.Zhou, Q. et al. (2011). Localized colonic stem cell transplantation enhances tissue regeneration in murine colitis. J Cell Mol MedBarbier de La Serre, C. et al. (2010). Propensity to high-fat diet-induced obesity in rats is associated with changes in the gut microbiota and gut inflammation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 299, G440.Choi, B. et al. (2010). Cell behavior on extracellular matrix mimic materials based on mussel adhesive protein fused with functional peptides. Biomaterials 31, 8980.Cramer, C. et al. (2010). Persistent high glucose concentrations alter the regenerative potential of mesenchymal stem cells. Stem Cells Dev 19, 1875.Fan, Q. et al. (2010). Requirement of TGFβ signaling for SMO-mediated carcinogenesis. J Biol Chem 285, 36570.Hildreth, B. et al. (2010). PTHrP 1-141 and 1-86 increase in vitro bone formation. J Surg Res 162, e9.Hong, D. et al. (2010). Morphological and proteomic analysis of early stage of osteoblast differentiation in osteoblastic progenitor cells. Experimental Res 316, 2291.Hu, J. et al. (2010). Response of human embryonic stem cells derived mesenchymal stem cells to osteogenic factors and architectures of materials during in vitro osteogenesis. Tissue Engineer Part A 10.1089/ten.TEA.2010.0097.Kanwar, S. et al. (2010). The Wnt/beta-catenin pathway regulates growth and maintenance of colonospheres. Mol Cancer 6, 212.Kemmis, C. et al. (2010). Bone morphogenetic protein 6 drives both osteogenesis and chondrogenesis in murine adipose-derived mesenchymal cells depending on culture conditions. Biochem Biophys Res Commun. 401, 20.Lu, C. et al. (2010). MT1-MMP controls human mesenchymal stem cell trafficking and differentiation. Blood 115, 221.Misra, S. et al. (2010). Effect of nanoparticulate bioactive glass particles on bioactivity and cytocompatibility of poly(3-hydroxybutyrate) composites. J R Social Interface 7, 453.Oku, S. et al. (2010). JAK2 V617F uses distinct signalling pathways to induce cell proliferation and neutrophil activation. British journal of Haematology 150, 334.Raucci, MG. et al. (2010). Biomineralized porous composite scaffolds prepared by chemical synthesis for bone tissue regeneration. Acta Biomater 10.1016/j.actbio.2010.04.018.Thi, MM. et al. (2010). Characterization of hTERT-immortalized osteoblast cell lines generated from wild-type and connexin43-null mouse calvaria. Am J Physiol Cell Physiol 299, C994.Wang, J. et al. (2010). The odontogenic differentiation of human dental pulp stem cells on nanofibrous poly(l-lactic acid) scaffolds in vitro and in vivo. Acta Biomaterialia 6, 3856.Zhang, Z. et al. (2010). A comparison of bioreactors for culture of fetal mesenchymal stem cells for bone tissue engineering. Biomaterials 31, 8684.Hemauer, S. et al. (2009). Opiates inhibit paclitaxel uptake by P-glycoprotein in preparations of human placental inside-out vesicles. Biochem Pharm 78, 1272.Kurimoto-Nakano, R. et al. (2009). Replicative senescence of vascular smooth muscle cells enhances the calcification through initiating the osteoblastic transition. Am J Physiol Heart Circ Physiol 297, H1673-H1684Lee, J. et al. (2009). Modular peptides promote human mesenchymal stem cell differentiation on biomaterial surfaces. Acta Biomater 6, 21.Pennisi, A. et al. (2009). Inhibitor of DASH proteases affects expression of adhesion molecules in osteoclasts and reduces myeloma growth and bone disease. British J of Hematology 145, 775.Stanisic, V. et al. (2009). OTU domain-containing ubiquitin aldehyde-binding protein 1 (OTUB1) deubiquitinates estrogen receptor (ER) α and affects ERα transcriptional activity. J Biol Chem 284, 16135.Zhang, Z. et al. (2009). Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells. Stem Cells 27, 126.Haraguchi, N. et al. (2008). CD133+CD44+ population efficiently enriches colon cancer initiating cells. Ann Surg Oncol 15, 2927.Meng, Q. et al. (2008). Regulating the age-related oxidative damage, mitochondrial integrity, and antioxidative enzyme activity in fischer 344 rats by supplementation of the antioxidant epigallocatechin-3-gallate. Rejuv Res 11, 649.Scaffidi, P. et al. (2008). Lamin A-dependent misregulation of adult stem cells associated with accelerated ageing. Nature Cell Biol 10, 452.Bae, J. et al. (2007). Engineering a disulfide bond to stabilize the calcium binding loop of activated protein C eliminates its anticoagulant but not protective signaling properties. J Biol Chem 10.1074/jbc.M610547200.Yang, L. et al. (2007). Identification of a specific exosite on activated protein C for interaction with protease-activated receptor 1. J Biol Chem 282, 25493. |
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
ebiomall.com
公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
蚂蚁淘承诺
正品保证： 全球直采 在线追溯
蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
及时交付： 限时必达 畅选无忧
蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
轻松采购： 在线下单 简单省事
蚂蚁淘的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价； 报价单与合同可以直接在线生成或打印；就像在京东购物一样， 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购，订单详情会告诉您所有进程。
售后申请： 耐心讲解 优质服务
蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-08-09
慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。... 查看更多
>
2021-09-11
吉满生物科技（上海）有限公司是慢病毒包装/AAV腺相关病毒包装/腺病毒包装包装/shRNA/RNAi/基因过表达/microRNA/lncRNA载体构建/稳定细胞株筛选/稳转株构建/课题设计技术服务商之一，从事慢病毒包装/AAV腺相关病毒包装/腺病毒包装包装/shRNA/RNAi/基因过表达/microRNA/lncRNA载体构建/稳定细胞株筛选/稳转株构建/课题设计已经多年。同时，生物在线为您提供众多企业慢病毒包装/AAV腺相关病毒包装/腺病毒包装包装/shRNA/RNAi/基因过表达/microRNA 查看更多
>
2021-08-24
各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各 查看更多
>
2021-08-08
稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。 在基因功能的 查看更多
>
2021-09-12
上海锐赛生物技术有限公司在发布的稳转株构建供应信息，浏览与稳转株构建相关的产品或在搜索更多与稳转株构建相关的内容。 查看更多
>
2021-08-02
赛业（广州）生物科技有限公司在发布的稳转株构建供应信息，浏览与稳转株构建相关的产品或在搜索更多与稳转株构建相关的内容。 查看更多
>
2021-09-10
上海麒盟生物科技有限公司在发布的基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKD-Stable)供应信息，浏览与基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKD-Stable)相关的产品或在搜索更多与基因敲减慢病毒稳转细胞株 (LentiKD-Stable)相关的内容。 查看更多
>
2021-07-30
上海信裕生物科技有限公司在发布的TLR3 Stable Cell Line、TLR3 稳转细胞株、TLR3 Stably Transfected HEK 293 Cells 、TLR3 稳转HEK 293细胞株供应信息，浏览与TLR3 Stable Cell Line、TLR3 稳转细胞株、TLR3 Stably Transfected HEK 293 Cells 、TLR3 稳转HEK 293细胞株相关的产品或在搜索更多与TLR3 Stable Cell Line、TLR3 稳转细胞株、TLR3 Sta 查看更多
>
2021-07-28
沃登医学在发布的稳转细胞株构建供应信息，浏览与稳转细胞株构建相关的产品或在搜索更多与稳转细胞株构建相关的内容。 查看更多
>
2021-07-19
简介： 【HEL细胞】，细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员，可提供复苏细胞，冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前，最好的细胞售后，为老师们提供放心科研细胞。具体详情请致电咨询：4000-520-616详细说明： 【HEL细胞】产品特点：细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员，可提供复苏细胞，冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前，最好的细胞售后， 查看更多
>
2021-08-03
检验科独立只是美丽的误解最近一篇网文火爆全国，就是检验科将被独立出医院的传闻。说是传闻也不完全正确，国家卫计委确实下发了文件，不过解读人不同可能有不同的理解。而且文中提到的实验室不包括医院的检验科，所以检验科独立成为法人短时间内还是不可能的。所以对于文件，大家一定要亲自看全文，而且也要看附件信息，微信传的东西看看就好，包括笔者这篇 查看更多
>
2021-07-24
北京英茂盛业生物科技有限公司在发布的线粒体定位EGFP稳转细胞系（Hela）供应信息，浏览与线粒体定位EGFP稳转细胞系（Hela）相关的产品或在搜索更多与线粒体定位EGFP稳转细胞系（Hela）相关的内容。 查看更多
>
常见问题
蚂蚁淘所售产品均为正品吗？
蚂蚁淘的创始人兼CEO是钟定松先生，具有十年的从业经验，在业界享有良好的口碑；
Ebiomall是跨境直采平台，我们直接从厂家采购，自己的团队负责国际物流和清关，中间没有第三方，蚂蚁淘承诺所售产品仅为正品，假一罚十。
下单后可以修改订单吗？
未确认状态的订单可以修改，打开“订单详情”页面，点击右上角的“修改订单”即可，若已审核确定，则订单无法修改。
商品几天可以发货？
现货产品付款审核后即可发货,大部分期货产品在3周左右即可到货,提供时必达服务的产品订单审核十天内即可发货。
订单如何取消？
如订单处于未确定状态，进入“我的订单"页面，找到要取消的订单，点击“取消订单”按钮。
可以开发票吗？
本网站所售商品都是正规清关，均开具13%正规发票，发票金额含配送费金额，另有说明的除外。
如何联系商家？
蚂蚁淘任何页面都有在线咨询功能，点击“联系客服”、“咨询”或“在线咨询”按钮，均可咨询蚂蚁淘在线客服人员，
或拨打4000-520-616，除此之外客户可在 联系我们页面找到更多的联系方式。
收到的商品少了/发错了怎么办？
同个订单购买多个商品可能会分为一个以上包裹发出，可能不会同时送达，建议查看订单详情是否是部分发货状态；如未收到，可联系在线客服或者致电4000-520-616。
退换货/维修需要多长时间？
一般情况下，退货处理周期为客户收到产品一个月内（以快递公司显示签收时间为准），包装规格、数量、品种不符，外观毁损、短缺或缺陷，请在收到货24小时内申请退换货；特殊商品以合同条款为准。
商品咨询
G418筛选稳定表达细胞系PROTOCOL 实验方法123
二洋旣獎b38JV2021-08-06
稳定细胞株筛选是一个长期的过程，稳定细胞株筛选优化，有许多条件需要摸索，而且是从源头开始
① 在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量
③ 细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠卵巢细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选，双抗预防污染，筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验，而且转染的时候不能有抗生素，关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
① 在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量
③ 细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠卵巢细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选，双抗预防污染，筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验，而且转染的时候不能有抗生素，关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
把质粒转入细胞的方法步骤是什么啊请教一下_问答详情_细胞转染_...123
泽田27丶TA傹2017-10-02
要看你是什么细胞，是想过表达还是knock down一个基因，稳转还是瞬转。
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
方法
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。
病毒感染
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。
常用步骤
1. 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体[1]体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
方法
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。
病毒感染
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。
常用步骤
1. 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体[1]体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。
转染细胞的稳定筛选 实验方法123
流年ノ01072017-10-02
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
【求助】瞬转、稳转? 细胞技术讨论版论坛123
zjliuzj2021-08-01
【实验求助】抑癌基因功能研究一定要稳转的细胞株吗? 细胞生物...123
zph20042021-08-03
哺乳动物质粒稳转是随机插入的吗123
坏趾步滤2017-10-02
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.
由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.
稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.
稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。
利用改良的CRISPR_Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除...123
小Z践踏6632017-10-06
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
求嘌呤霉素筛选稳转细胞株的详细步骤 分子生物 综合其他...123
那那朱2021-07-20
垃圾分类投标技术方案(技术标)123
2021-07-25
稳转细胞系常用的方法有脂质体转染和慢病毒转染进行稳定株筛选，脂质体法筛单克隆时间耗时长，假阳性高，且效率低，大概只有1%。病毒转染得到稳定细胞株的效率高，只是步骤繁琐。
如果经费充足的话可以找公司包装病毒，如武汉的普健可以提供各种载体的构建及细胞株构建的技术服务。
如果经费充足的话可以找公司包装病毒，如武汉的普健可以提供各种载体的构建及细胞株构建的技术服务。
【求助】逆转录病毒载体不带GFP,如何进行构建稳转细胞株?谢谢 ...123
drjasionzl2012-12-11
上海做细胞培养技术服务的公司,可靠的,有没有推荐? 123
red19862021-08-04
如题，需要对一株肝癌细胞构建稳转细胞株成默其中的一个基因，上海有哪家公司做这个效果比较好的呢？有知道的站友麻烦推荐一下谢谢。
如何实现质粒的稳定转染? 生物科学 学术 科研 互动...123
星子11752021-08-11
6kb并不大，作为质粒转染是没有问题的。
至于到底好不好转就跟你的细胞有关了，和细胞是否是稳转株关系不大。
至于到底好不好转就跟你的细胞有关了，和细胞是否是稳转株关系不大。
▍
品牌分类
▍
品牌问答
暂无品牌问答
