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biopioneerinc/Human Recombinant TGF-beta, 1ug/1/SC-038-1
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Description:Human TGFb1 (GenBank Accession #NM_000660), a.a. 279-390(end), disulfide-linked homodimer. MW= ~25 kDa.
Source: FreeStyle 293-F cells.
Endotoxin Level: <1 EU/μg.
Activity assay: measured by TGFβ1’s ability to inhibit mIL-4-dependent proliferation of HT-2 mouse helper T cells. The ED50 is <0.05ng/ml.
Application: Useful for cell culture and for the study of signaling and apoptotic pathways.
Description:Human TGFb1 (GenBank Accession #NM_000660), a.a. 279-390(end), disulfide-linked homodimer. MW= ~25 kDa.
Source: FreeStyle 293-F cells.
Formulation: Lyophilized from a 0.2 μM filtered, aqueous solution
Reconstitution: Supplied as a lyophilized solid. Reconstitute in 0.2 M acetic acid with 0.1% BSA.
Stability:>6 months at –80°C (as a solid). Store reconstituted protein in aliquots at –80°C for up to 3 months. Avoid freeze/thaw cycles.
References:
Biopioneer Brand:
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2021-09-02
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surface marke 查看更多
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2021-08-29
8 eggs per day, day 7- day 13 cut CAM, wash in precooled PBS, in 10 ml WASH 1 (PBS, 5 mM EDTA, COMPLETE) on ice cut in pieces in petri dish on ice centrifuge 4 查看更多
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2021-08-19
服务名称:稳转细胞系构建 查看更多
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2020-08-14
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的Identi™ STR Cas9稳转细胞株系列供应信息,浏览与Identi™ STR Cas9稳转细胞株系列相关的产品或在搜索更多与Identi™ STR Cas9稳转细胞株系列相关的内容。 查看更多
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2021-09-12
上海锐赛生物技术有限公司在发布的稳转株构建供应信息,浏览与稳转株构建相关的产品或在搜索更多与稳转株构建相关的内容。 查看更多
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2021-08-08
稳定表达细胞株(稳转细胞株)指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上,使细胞长期稳定表达该基因。 在基因功能的 查看更多
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2021-09-08
武汉金开瑞生物工程有限公司在发布的稳转细胞株构建供应信息,浏览与稳转细胞株构建相关的产品或在搜索更多与稳转细胞株构建相关的内容。 查看更多
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2021-07-25
服务名称:吉满生物慢病毒包装/AAV腺相关病毒包装/腺病毒包装包装/shRNA/RNAi/基因过表达/microRNA/ 查看更多
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2021-07-15
凡是由受精卵发育而来,且体细胞中含有两个染色体组的生物个体,均称为二倍体。可用2n表示。人和几乎全部的高等动物,还有一半以上的高等植物都是二倍体。... 查看更多
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2021-09-06
上海英拜生物科技有限公司在发布的microRNA整套技术服务(靶基因功能验证服务,报告基因载体,过表达载体,稳转细胞株等等)供应信息,浏览与microRNA整套技术服务(靶基因功能验证服务,报告基因载体,过表达载体,稳转细胞株等等)相关的产品或在搜索更多与microRNA整套技术服务(靶基因功能验证服务,报告基因载体,过表达载体,稳转细胞株等等)相关的内容。 查看更多
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2021-07-16
简介: 【HEL-2细胞】,细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,最好的细胞售后,为老师们提供放心科研细胞。具体详情请致电咨询。详细说明: 【HEL-2细胞】产品特点:细胞库拥有专业细胞实验室及技术人员,可提供复苏细胞,冻存细胞。全国统一最低价格。专业的细胞售前,最好的细胞售后,为老师 查看更多
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2021-08-05
hl-60细胞是一种用于实验室研究某些血细胞如何形成的细胞株。在培养基中补充牛胎儿血清.HEPES,抗生素类化学物质,L-谷氨酰胺,通过悬浮培养,hl-60细胞能持续增殖。... 查看更多
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逆转录聚合酶链反应(RTPCR,rtpcr)资讯123
qishi51142021-08-08
筛选稳定表达细胞株转染后多久药物筛选123
饼饼4912021-07-26
稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始①在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证②高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量③细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染④后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染稳定细胞系构建的相关理论
转染细胞的稳定筛选 实验方法123
流年ノ01072017-10-02
基因敲出质粒转染可以构建稳定细胞株
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
把质粒转入细胞的方法步骤是什么啊请教一下_问答详情_细胞转染_...123
泽田27丶TA傹2017-10-02
要看你是什么细胞,是想过表达还是knock down一个基因,稳转还是瞬转。
细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。
方法
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室最方便的转染方法之一,其转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性,所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,可以大大的降低细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率。
病毒感染
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染,此法可以快速100%感染,检测成功率高。
常用步骤
1. 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体[1]体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养基继续培养24-48小时。
细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。
方法
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用,将DNA分子包裹入内,形成DNA脂复合物,也能被表面带负电的细胞膜吸附,再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前实验室最方便的转染方法之一,其转染率较高,优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性,所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内,这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下,高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂,可以大大的降低细胞的死亡率,同时提高电穿孔转染效率。
病毒感染
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染,此法可以快速100%感染,检测成功率高。
常用步骤
1. 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体[1]体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养基继续培养24-48小时。
自己操作的难度比较大。一般有一定经验的外科医生才会打这个麻醉,打不好是没有效果的。最好去专业医疗机构医院或者诊所,那里会比较专业。效果也比较好.
【求助】请问质粒转染细胞后能够稳定表达多久? 考研123
无聊7Ns2021-08-17
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
如何构建重组质粒转染后稳定表达的细胞系 分子生物 ...123
元超瞄2021-08-02
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。
【求助】逆转录病毒载体不带GFP,如何进行构建稳转细胞株?谢谢 ...123
drjasionzl2012-12-11
【专题讨论】慢病毒转染后筛选稳定株 细胞技术讨论版123
最爱hi112021-08-12
帮同学问:最近要筛选一个人肺癌细胞稳定转染株,用什么方法比较好呢?目的细胞是人肺癌细胞,在其他地方看到有的用质粒,有的用慢病毒进行稳定株筛选,两种方法有什么区别呢,具体操作是什么呢?望有大神告知
构建好的稳转过表达细胞株,为什么又不表达目的基因了 123
惊叹号7522021-07-24
转入目的基因但为什么不表达mRNA
先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.
先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.
正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR.
【交流】两种腺病毒载体可以同时转染一种细胞吗? 核酸基因技术...123
daskjfha1502017-10-02
不能
G418筛选稳定表达细胞系PROTOCOL 实验方法123
二洋旣獎b38JV2021-08-06
稳定细胞株筛选是一个长期的过程,稳定细胞株筛选优化,有许多条件需要摸索,而且是从源头开始
① 在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量
③ 细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠卵巢细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
① 在构建载体时,目的基因直接整合到细胞染色体组上,最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法,因为转染效率没有保证
② 高表达载体的构建,哺乳动物表达量一直是它自身的缺点,最好根据高表达载体定向的驯化细胞,提高蛋白表达量
③ 细胞的选择,筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO,中国仓鼠卵巢细胞,由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株,而HEK293细胞则常用于瞬时转染
④ 后期的筛选,双抗预防污染,筛选细胞的时候抗生素浓度一定要做预实验,而且转染的时候不能有抗生素,关于细胞转染 稳定细胞系构建的相关理论
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