求助 固体培养基上的菌落，无法用液体培养基扩增
2017-06-23
问题描述：
大家好，我是一个质粒小菜鸟，最近遇到个奇怪的事情，希望大家帮忙看看，究竟出了什么问题。
我构建了一个氨苄抗性的质粒，这个质粒在固体培养基里长出了单菌落，但是我挑菌在液体培养基里无法扩增出来。固体培养基和液体培养基一起配置的，氨苄浓度一致，唯一不同的是固体培养基里加入了琼脂。为了防止是氨苄的问题，我把这个固体培养基上的菌落挑划了新的板，依然能长出菌落。而同一次配置的液体培养基，也能扩增其他质粒，所以我实在想不出是什么其他问题，希望大家帮帮忙。
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dxy_mc067er5
用户
质粒有没有导入感受态细胞？
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dxy_mc067er5
用户你直接用质粒在固体培养基培养的？你有没有进行连接转化？
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念123
用户固体琼脂板氨苄的问题。氨苄高温会失效
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qq890914
用户展开引用寻影大家好，我是一个质粒小菜鸟，最近遇到个奇怪的事情，希望大家帮忙看看，究竟出了什么问题。我构建了一个氨苄抗性的质粒，这个质粒在固体培养基里长出了单菌落，但是我挑菌在液体培养基里无法扩增出来。固体培养基和液体培养基一起配置的，氨苄浓度一致，唯一不同的是固体培养基里加入了琼脂。为了防止是氨苄的问题，我把这个固体培养基上的菌落挑划了新的板，依然能长出菌落。而同一次配置的液体培养基，也能扩增其他质粒，所以我实在想不出是什么其他问题，希望大家帮帮忙。......平板怎么倒的？配置好高压后，等冷却再加抗生素？还是高压前加的？
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寻影
用户dxy_mc067er5质粒有没有导入感受态细胞？这个是用氨苄筛选，长出来应该就是导入了(>﹏<)
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寻影
用户dxy_mc067er5你直接用质粒在固体培养基培养的？你有没有进行连接转化？进行连接转化了呀，DH5菌
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寻影
用户念123固体琼脂板氨苄的问题。氨苄高温会失效可是，作对照的那个板上一个菌都没有(>﹏<)
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dxy_mc067er5
用户寻影可是，作对照的那个板上一个菌都没有(>﹏<)进行酶切验证
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寻影
用户dxy_mc067er5进行酶切验证可是无法用液体培养基扩增呀(>﹏<)怎么酶切验证呢？
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duxiaoye
用户我猜是你挑菌的时候，接种证还没冷就去挑菌了，活活烫死了(〜￣▽￣)〜
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