方案14.2 条件培养基的制备
| 实验方法原理 | 收集对数生长晚期的同源或异源细胞系的培养基，过滤，根据需要用新鲜培养基稀释。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 条件细胞 仪器、耗材 | 克隆用培养基除菌滤器 实验步骤 | 1.条件细胞（条件细胞：同一种细胞、其他细胞系（如，3T3细胞），或小鼠胚胎成纤维细胞）生长至50%汇合。 2.更换培养基，继续培养48h。 3.收集培养基。 4.离心，1000g，10min。 5.0.45μm无菌过滤器（除菌滤器：0.45μm或0.22μm，过滤瓶）过滤（培养基可以先经过5μm和1.2μm过滤器预先过滤)。 6.将条件培养基（克隆用培养基：Ham’sF12，加10%FBS或适合待克隆细胞的培养基）-20°C保存。 7.用前解冻，按照如下比例加在克隆培养用培养基中：1份条件培养基加2份克隆培养用培养基。 其他 | 离心、冻存、解冻、过滤，这些步骤都有助于避免从原培养瓶中携带细胞。如果克隆培养的细胞与条件细胞是同一种细胞，这个问题就轻一点。但是用不同细胞系或原代小鼠成纤维细胞作为条件细胞可能更有利于克隆培养。如果用这种方法建立细胞株，细胞的性质必须经过鉴定（见方案16.10、方案16.11、方案16.12)，排除因条件培养基而引起的细胞交叉污染。 |
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发布于 ： 2021-08-02
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