在第二十六届亚太肝病学会年会上，北京大学基础医学院病原生物学系王杰博士对鲁凤民教授课题组有关血清HBVRNA与肝细胞内ccCDNA之间的相关性研究进行了大会发言。
在我国，慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染所致疾病仍是严重威胁国人健康的重大传染性疾病。全国现有慢性HBV感染者约7000～9000万，其中慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者约2000～3000万，需立即接受治疗的患者约有700万例，然而目前仅100～350万慢乙肝患者正在接受抗病毒治疗。虽然积极的抗HBV药物能够明显延缓肝脏疾病进程、减少终末期肝病的发生，但以血清HBV表面抗原（HBsAg）转阴作为临床治愈的指标，现行的抗病毒治疗药物仅能使很少一部分患者达到功能性临床治愈。
对于慢乙肝难以治愈的原因，既往多认为与肝细胞核内HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）过长的半衰期有关。然而，越来越多的实验证据显示，HBVcccDNA的半衰期不足两个月。由此可见，新合成的rcDNA进入细胞核内并转换成cccDNA，对肝细胞内cccDNA池的维持至关重要。理论上讲，通过长期使用核苷（酸）类似物（NA）药物可使cccDNA最终被耗竭。理论上讲，cccDNA消失是HBV彻底清除的真正标志，但由于检测cccDNA需要进行具有创伤性的肝组织活检，且cccDNA检测灵敏度和特异度较低的原因，使得肝组织cccDNA检测在临床上难以推广。因而，临床上常以血清HBsAg消失和/或anti-HBs血清学转换作为实现慢乙肝功能性治愈（临床治愈）的标志。然而，即使是接受长期的治疗的慢乙肝患者，其HBsAg消失的比例实际上仍然非常低。
最近一篇来自香港的研究显示，血清HBsAg与cccDNA在未经抗病毒治疗的慢乙肝患者中具有相关性，经核苷（酸）类药物（NA）治疗后这种相关性消失。具体而言，在43例长时间接受NA治疗（平均治疗时间>7年）的患者中，有近半数肝组织内未检测到cccDNA，但却只有1例发生血清HBsAg阴转。考虑到慢性乙肝患者肝脏组织高水平的HBVDNA整合，我们有理由相信，这些患者的HBsAg多来自整合的病毒DNA片段。
1996年德国学者Köck等却在慢性HBV感染者血清中发现HBVRNA的存在。我们和其他实验室近期对血清中HBVRNA来源的研究发现，患者血清中的HBVRNA实为未经逆转录的前基因组RNA（pregenomicRNA,pgRNA），这些pgRNA和rcDNA一样，存在于成熟的病毒颗粒的核衣壳内。我们称这种病毒颗粒为「HBVRNA病毒样颗粒」。
不同于血清HBsAg，血清中的HBVpgRNA仅能来自cccDNA。在病毒基本核心启动子的作用下，pgRNA自cccDNA的第1818（1819）位核苷酸（nucleotide,nt）起始沿cccDNA的负链为模板转录，当RNA链合成延伸至转录起始位点时并未停止，而是继续沿模板延伸，至1789～1794nt的加polyA信号时，转录停止，并在加polyA酶的作用下在其3』端加上多个腺苷酸。这样3.2kb的闭合环装cccDNA就产生了3.5kb的pgRNA。整合的病毒DNA的主要来源双链线性DNA（DSL-DNA），全长仅有3.2kb，无法转录形成3.5kb长的pgRNA。
来自德国Dandri教授的实验室通过人源化uPA/SCID/beige小鼠模型证实血清HBVRNA能够很好地反映肝组织内cccDNA的活性。基于此，本课题组在慢乙肝患者中进一步探讨了血清HBVRNA与肝细胞内cccDNA之间的关系。首先，在未经抗病毒治疗的慢乙肝患者中，我们根据HBeAg状态将慢乙肝患者分为HBeAg阳性和阴性患者。
结果证实，血清HBVRNA在未经抗病毒治疗的HBeAg阳性慢乙肝患者中与cccDNA呈正相关，而在HBeAg阴性慢乙肝患者中无相关性（图1）。进一步，我们在经NA治疗的慢乙肝患者中证实血清HBVRNA可反映cccDNA的状态（包括其存在有无和转录活性），结果提示，若血清HBVRNA持续消失，一方面反映肝细胞内cccDNA可能被清除，另一方面其可能处于转录沉默状态（表1）。
图1血清HBVRNA与肝细胞内cccDNA的相关性。（A）在HBeAg阳性和阴性慢乙肝患者（B）中血清HBVRNA与肝细胞内cccDNA的相关性。
表1血清HBVRNA在经NA治疗的慢乙肝患者中与肝细胞内cccDNA状态的关系
由此可见，血清HBVRNA具有反映患者肝组织内cccDNA活性的优越性，为通过检测血清HBVRNA来间接反映患者肝组织内cccDNA的活性提供了可能。我们建议，以血清HBVRNA持续消失来反映患者肝组织内cccDNA的消失或者表达静默状态。这些患者尽管cccDNA已被清除或处于持续的表达静默状态，但由于整合的病毒DNA片段可以持续低水平表达HBsAg，他们的血清HBsAg仍可有低值阳性。
我们用一个新的「准临床治愈」（para-functionalclinicalcure）概念来定义这些已经接近临床治愈的患者，以对现有的慢乙肝功能性的「临床治愈」（functionalcure）概念进行修订和补充。其意义在于不仅可以让更多的接受NA治疗的慢乙肝患者安全停药、不再受终生用药之苦；治愈率的提高也将使更多的患者愿意接受NA为主的抗病毒治疗，相信这「准临床治愈」概念必将对未来的临床实践产生一定的影响。
