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Sporulation in Liquid Media
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SporulationinLiquidMedia

1)Growcellsin25mlsofPSP2(in250mlflask)supplementedwith25%oftherecommendedconcentrationofaminoacidsuntiltheyareabout1x107cells/ml(~1day).2)Washwithoncewith25mlsofsterilewater.3)ResUSPendin25mlsofSPMmedia.4)Leave1to2daysandcheckundermicroscopefortheformationoftetrads.Totetraddissect:6)Transfer1mltoa1.5mlmicrofugetube.7)Spindownandsuckoffs/n.8)Resuspendin950µlofP-solution.9)Add50µlof10mg/mlzymolyase(besuretospindownthezymolyasebeforeuse).10)Letstand@roomtemp.for~10minsthenputonice.Checkasmallsampleunderthescopetoseeifthecellwallhasbeendigested.Try5moreminutesiftheyaren’tdigestedyet.11)Drip20µlontoaYEPDplateinalinenearthetopoftheplate.Thentilttheplatebackandforthuntilyourdripsruntogetherandyouhaveaniceline.Marktheedgesofyeastlineonthebottomoftheplatetohelplineupyourplateonthescope.*Idealtetraddissectingplatesshouldbepouredthinandeven,andstoredatroomtemperature.*Onceyouhavedrippedyouryeastontheplateitcanbeusefultolettheplatesitforacoupleofhourssothatthesporescansettleinandspreadout,butitisnotnecessary.

PSP2

  • 6.7gYNBwithoutaminoacids
  • 1gyeastextract
  • 10gpotassiumacetate
  • Mixin1Lof50mMpotassiumphthalatebuffer(pH5.0)

SPM

  • 3.0gpotassiumacetate
  • 0.2graffinose
  • Mixin1Ldistilledwater

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