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Human Alkaline Phosphatase staining of transgenic embryo/tissue
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APBuffer:

  • 100mMTris-HCl,pH9.5
  • 100mMNaCl
  • 10mMMgCl2

PTM:

  • PBS
  • 0.1%Tween-20
  • 2mMMgCl2

SincethisisgenerallydoneinconjunctionwithlacZstaining,embryo/tissueisusuallyfixedasperlacZstaining.Forwholemountstaining,penetrationofstainmaybeimprovedbyfixinginPBS+0.2%glutaraldehyde+0.02%NP-40+0.01%NaDC(at4oC).

  • RinseinPBS.
  • HeatinactivateendogenousalkalinephosphataseactivitybyincubationinPBSat70-75oCfor30minutes.
  • RinseinPBSatRT.
  • WashinAPBufferfor10minutes.
  • StainwithBMPurpleAPSubstrateat4oCfor0.5to36hours(N.B.IncubationatRTwillgiveaquickerresultbutmayresultinseepageofstaining.Also:NBT/BCIPAPstaininghasbeentriedwith9.5dpcembryosbutgaveamauvebackground).
  • WashextensivelyinPTM.

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