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Thawing Cells (Schreiber's protocol)
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  1. Thawvialquicklyin37癈water.Caution-vialcanexplode.
  2. Transfercellstosterile,15mLcentrifugetube.
  3. Add50祃warmFBS(fetalbovineserum,heatinactivated),wait1minute.
  4. Add100祃FBS,wait1minute.
  5. Add200祃FBS,wait1minute.
  6. Add400祃FBS,wait1minute.
  7. Add800祃FBS,wait1minute.
  8. Centrifugefor5minutesat1000rpm.
  9. Afteraspiratingsupernatant,resUSPendin5-6mLwarmmedia.
  10. TransfertoT25(25cm2flask).
  11. Incubateat37癈and5%CO2withtopofflaskloose.
  12. Nextday,checkthatcellsareviableandattached.Pourofforaspiratemedia.Add5-6mLfreshwarmmedia.
  13. PassageintoT75whencellsbecomeconfluent(somecells,likeRCHO-1neverbecomeconfluent)

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