Freezing cells in liquid nitrogen
来自 : 蚂蚁淘
- TakeoffMedia
- Trypsinatewith1mlx2DulbeccoAtrypsin
- Add7mlMedia
- Pipetteupanddowntodistributecellsthroughoutmedia(i.e.notclumpedtogether)
- Addmediatosterilefalcontube(15ml=1flask,50ml=5flasks)
- Spindown1-2K,5mins
- Takeoffmedia
- ResUSPendpelletin9mlFCSand1mlDMSO
- Distributein1mlaliquots(10cryovials)
- Movecellsto-84oCovernightwrappedincottonwoolinapolystyrenebox
- FinallyfreezecellsinliquidN2
Unthawing
- WarmDMEMinwaterbath
- Thawcryovialat37oCquicklyuntilcellsbecomemolten.
Aliquotthe1mlofcellsusingadisposablepipetteinto10mlfreshmediainaTCflask
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