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一篇文章把必拓通用细胞冻存液和无血清细胞冻存液的差别说透 企...
来自 : mayitao

随着实验室细胞培养的发展,除了原代培养之外,人工开发出来的细胞系的保存越来越重要。细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成,减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤,从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获得稀释,稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜,这是因为当低温保护剂稀释以后,该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。

通用细胞冻存液(无血清)主要由培养基、DMSO 等组成,不含血清,是一种经典的无菌冻存液。用于各种哺乳动物原代细胞、传代细胞系、杂交瘤细胞等的冻存。

冷冻保存细胞系的优点如下

1、减少基因漂移;

2、减缓细胞系的衰老;

3、稳定表型;

4、减少微生物污染及交叉污染机会等。

操作步骤[1]

1、培养细胞至对数生长晚期,显微镜观察其外观、形态、有无污染等,取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞,用胰蛋归酶消化并用完全培养基终止消化,进行细胞计数;如为悬浮生长细胞,进行细胞计数。

2、离心,弃上清。

3、加入适量的通用细胞冻存液,重悬细胞,使细胞浓度达到/ml,置于冻存管中,密闭、不要拧的太紧,避免弯曲变形。

4、一般进行冷冻。亦可采用-20 C 30min, -70 C 过夜,最后置于液氮罐中长期存储。

主要参考文献

[1] 李红霞 李瑞娇 张汝月 张引红 郭兴萍; 小鼠子宫内膜间充质干细胞的分离、培养及鉴定。《山西医科大学学报》 2019年09期。


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