Producedfromhumanfibroblastsmaintainedinserum-freemediaandthenpurifiedbiochemically.ThisissuppliedsterileinCAPSsalinebuffer.
Caution:Ifhandledimproperly,somecomponentsofthisproductmaypresentahealthhazard.Takeappropriateprecautionswhenhandlingthisproduct,includingthewearingofprotectiveclothingandeyewear.Disposeofproperly.
Fibronectinisamulti-domainglycoproteincomposedofanarrayofmultiplerepeatedmodularstructures.Cellularfibronectin,anadhesionglycoproteinoftheextracellularmatrix,existsasadimerwithamolecularmassof~550kDa. Thisstructureiscomposedoftwoheterodimers,theAchainandtheBchaincontainingthetypeIIIconnectingsegmentregion.Cellularfibronectindiffersfromplasmafibronectinbythepresenceofadditionalpolypeptidesegmentsanditscapacitytospecificallyregulatemorphologyandgrowthofattachedcellsincludingstemcells[1,2,3,4].Multipledomainsoffibronectinshowbindingaffinitiesforcollagen,fibrin,heparin,andspecificcellmembranereceptorssuchasintegrins.Fibronectinmatrixassemblyisessentialfornormaldevelopmentandcontributestothegenerationoftumormetastases.
SciencellTMHumanCellularFibronectin(HCF)isproducedfromhumanfibroblastsmaintainedinserum-freemediaandthenpurifiedbiochemically.HCFissuppliedsterileinCAPSsalinebuffer.
ProductSpecification
Quantity: 0.1mg
Concentration: 0.5mg/ml
Storagebuffer: CAPSsalinebuffer,pH11.
Specifications:
CatalogNo. | 8488 |
CountryofManufacture | UnitedStates |
ProductCode | HCF |
Size/Quantity | 100μg |
ProductUse | THESEPRODUCTSAREFORRESEARCHUSEONLY.Notapprovedforhumanorveterinaryuse,forapplicationtohumansoranimals,orforuseinclinicalorinvitroprocedures. |
Storage | Itisrecommendedtostoretheproductassingleusealiquotsat-80°C.Thawingshouldbedoneslowlyat2-8°Cwithnoagitation.Materialthatfailstodissolvecanberemovedbycentrifugation.Avoidrepeatingfreeze/thawcycles. |
ShippingInfo | Dryice. |
References | 1.YamadaKMandAkiyamaSK(1984).InMethodsforpreparationofmedia,supplementsandsubstrataforserum-freeanimalcellculture.pp.215-30.AlanR.Liss,Inc.,NewYork.2.AkiyamaSetal.(1985).FibronectinandfibronectinfragmentsinExtracellularMatrix:APracticalApproach,(NewYork),p.183.3.PottsJRandCampbellID(1994).FibronectinStructureandAssembly.Curr.CellBio,6:648-655.4.SinghP,SchwarzbauerJE(2012).Fibronectinandstemcelldifferentiation-lessonsfromchondrogenesis.JCellSci,15:3703-12. |
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我做的是细胞因子的刺激和抑制某条通路后观察是否有影响,分组为空白组,空白+抑制剂,刺激组,刺激+抑制剂,最开始用的单因素方差分析,LSD-T和SNK-Q检验,但是同学说我这里面有两个处理因素,所以不能单因素方差分析,应该直接空白和空白+抑制,空白和刺激,刺激和刺激+抑制剂进行独立样本T检验,现在脑子是混乱的,拜托园子里的大神们帮我看看,感激不尽!!
抑制剂刺激细胞后,需要用PBS清洗后再做后续实验吗
2.微孔板:选择实验所需的板条数。剩余不用的部分随同干燥剂密封放回原袋。 1.包被有抗抑制素bB亚单位抗体的微孔板(Anti-InhibinB-CoatedMicrotitrationStrips):96孔,2-8ºC下密封保存。
2.标准品A/样本稀释液(InhibinBStandardA/SampleDiluent):2ml×1瓶,胎牛血清,含0pg/mL二聚体抑制素B。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。
3.标准品B-G(InhibinBStandardsB-G):1ml×6瓶,胎牛血清,含二聚体抑制素B的浓度为10,30,100,250,500,1000pg/mL。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。
4.质控(InhibinBControls):1ml×2瓶,浓度I、II,胎牛血清,含低浓度和高浓度的抑制素A二聚体。使用前2-8ºC下保存。打开后2-8ºC下可保存2周。于-20ºC可长期保存。
5.样本稀释液A(InhibinBSampleBufferA):10ml×1瓶,2-8ºC下保存。
6.样本稀释液B(InhibinBSampleBufferB):10ml×1瓶,2-8ºC下保存。
7.抗体-生物素结合物(InhibinBAntibody-BiotinConjugate)(即用型):10ml×1瓶,含生物素标记的抗抑制素a亚单位抗体。2-8ºC下保存。
8.酶结合物(浓缩)(Streptavidin-EnzymeConjugate)(即用型):10ml×1瓶,含链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。2-8ºC下保存。
9.TMB底物溶液(TMBChromogenSolution):15ml×1瓶,2-8ºC下保存。
10.终止液(StoppingSolution):15ml×1瓶,为0.2M的硫酸。2-8ºC下保存。
11.浓缩洗液(WashConcentrate):100ml×1瓶,2-8ºC下保存。 操作前所有试剂都应平衡至室温(~25ºC)并充分混匀。标准品、质控及待测样本需同时做双份。
1.取出实验所需板条,并记录各孔位置。
2.在对应的孔中加入标准品、质控及待测样本各50ul。
3.每孔加入25ul样本稀释液A。
4.每孔加入25ul样本稀释液B。
5.封板,以300-400rpm速度震荡,室温下过夜(14-18小时)。
6.洗板3次,在吸水纸上拍干。
7.每孔加入50ul抗体-生物素结合物。
8.封板,以500-700rpm速度震荡,室温下孵育1.5小时。
9.洗板6次,在吸水纸上拍干。
10.每孔加入50ul链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。
11.封板,以500-700rpm速度震荡,室温下孵育20分钟。
12.洗板6次,洗完最后一次以后,将洗液在孔内停留15分钟再除去。在吸水纸上拍干。
13.在每孔中加入100ulTMB底物溶液。
14.以500-700rpm速度震荡,室温下避光孵育15-30分钟。
15.每孔加入100ul终止液。
16.30分钟内在450nm处读数。
注:必须以零标准作空白。如果能做到双波长测定,可在600或620nm处读数,将600(620)nm吸收值从450nm处减去,这样可以减少光学误差。 使用血清样本,静脉穿刺术采集血液。样本于2-8ºC可保存24小时,-20ºC或以下可保存30天。避免反复冻融样本。不应采用溶血或脂血的样本。冰冻的样本在实验前应解冻,并充分混匀。向左转|向右转
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