分享：原代肿瘤细胞分离培养关键因素

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分享：原代肿瘤细胞分离培养关键因素

2017-03-29

问题描述：

近期根据经验总结了原代肿瘤细胞分离培养的2个关键因素。

1、组织的活性：如果我们取的都是坏死的组织或者结缔组织，我相信任何方法都不可能分离出来活的细胞的。另外，取完的组织要冷藏存放，并且越早分离越好，最好在24h内，最久不要超过48h。

2、组织的消化：在组织消化前，组织剪的越碎越好（1mm3左右为宜），组织的大小决定了组织的消化时间，不同组织消化时间差别较大：例如肺癌在2h-2.5h；食管癌在1个多小时。

希望可以帮到各位研友，另外如果大家有更好的经验可以一起来讨论！

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飞凡细胞

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你用什么消化组织的？胰酶吗？

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goodyezi

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飞凡细胞你用什么消化组织的？胰酶吗？消化组织用胶原酶和分散酶。后期消化细胞会用到胰酶

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longshao2014

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你使用的是哪个品牌的分离培养试剂盒

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飞凡细胞

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这三种酶怎么用？可以分享吗？我一直用的胰酶消化的组织结果不怎么好

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goodyezi

用户

飞凡细胞这三种酶怎么用？可以分享吗？我一直用的胰酶消化的组织结果不怎么好单纯胰酶肯定是不行的，至少得有胶原酶。

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xiaocaiv

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楼主，你取完的组织冷藏保存是怎么保存，我都直接丢液氮速冻

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飞凡细胞

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楼主方便告诉酶的用量和比例吗？不方便的话可不可以寄点你配好的酶液给我用用啊

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goodyezi

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xiaocaiv楼主，你取完的组织冷藏保存是怎么保存，我都直接丢液氮速冻放到样本保存液中的。我们也冻存过，但是放在特定的冻存液中才放液氮的。您那边直接丢液氮还能提取出来细胞吗？

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木子华

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xiaocaiv楼主，你取完的组织冷藏保存是怎么保存，我都直接丢液氮速冻我也想知道你怎么保存的，用FBS+培养基么？组织还能提出细胞么？

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xiaocaiv

用户

goodyezi放到样本保存液中的。我们也冻存过，但是放在特定的冻存液中才放液氮的。您那边直接丢液氮还能提取出来细胞吗？直接放液氮主要是以后提DNA或者RNA，再不然就做切片，提取细胞试过但是没成功······楼主你冻存后有成功提取过吗？提取之后的细胞能正常扩增吗？

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goodyezi

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xiaocaiv直接放液氮主要是以后提DNA或者RNA，再不然就做切片，提取细胞试过但是没成功······楼主你冻存后有成功提取过吗？提取之后的细胞能正常扩增吗？可以提取细胞啊。也能传代。但是比新鲜组织提取的效果差一些

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xiaocaiv

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goodyezi可以提取细胞啊。也能传代。但是比新鲜组织提取的效果差一些真的吗？可以分享一下冻存方法吗？

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verajiao517

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先关注着，马上开始养肿瘤原代细胞了

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goodyezi

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xiaocaiv真的吗？可以分享一下冻存方法吗？冻存组织要剪碎，使用组织专用冻存液，FBS:DMSO为9:1，同时添加保持组织活性的因子。室温放置30min，再放入冻存盒.负80度过夜，后可转入液氮。

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goodyezi

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verajiao517先关注着，马上开始养肿瘤原代细胞了有什么问题可以多多在这里讨论，有什么好的经验也请多多分享哦

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xiaocaiv

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goodyezi冻存组织要剪碎，使用组织专用冻存液，FBS:DMSO为9:1，同时添加保持组织活性的因子。室温放置30min，再放入冻存盒.负80度过夜，后可转入液氮。谢谢楼主的无私分享！！

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fenlichong

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培养的话用贴壁法也可以，消化不是必须的，而且消化后分离的单个细胞贴壁率可能不高。组织活性虽然很关键，但和组织的恶性程度，侵袭性等估计也有关系，有的组织离体超过48h也有可能爬出细胞，而且用普通培养基也可以培养，但毕竟是少数。另外，培养基也很关键，好的培养基适用于培养大部分肿瘤细胞类型，但如何连续传代和细胞的纯化是个问题，请教楼主培养原代肿瘤细胞用的什么培养基，可否推荐下参考文献？如何保持连续传代培养？

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木子华

用户

展开引用fenlichong培养的话用贴壁法也可以，消化不是必须的，而且消化后分离的单个细胞贴壁率可能不高。组织活性虽然很关键，但和组织的恶性程度，侵袭性等估计也有关系，有的组织离体超过48h也有可能爬出细胞，而且用普通培养基也可以培养，但毕竟是少数。另外，培养基也很关键，好的培养基适用于培养大部分肿瘤细胞类型，但如何连续传代和细胞的纯化是个问题，请教楼主培养原代肿瘤细胞用的什么培养基，可否推荐下参考文献？如何保持连续传代培养？......养间充质干细胞到是用过贴壁法，原代一般还是采取的消化培养，贴壁法营养要求高，而且相比较而言容易污染一点

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lixingde

用户

胶原酶有很多分型，不同分型对消化影响大吗？做了几次口腔癌原代培养，用的1型胶原酶，结果养出来的细胞大部分是成纤维细胞，肿瘤细胞贴壁很少，大家遇到过这种情况吗？

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goodyezi

用户

展开引用fenlichong培养的话用贴壁法也可以，消化不是必须的，而且消化后分离的单个细胞贴壁率可能不高。组织活性虽然很关键，但和组织的恶性程度，侵袭性等估计也有关系，有的组织离体超过48h也有可能爬出细胞，而且用普通培养基也可以培养，但毕竟是少数。另外，培养基也很关键，好的培养基适用于培养大部分肿瘤细胞类型，但如何连续传代和细胞的纯化是个问题，请教楼主培养原代肿瘤细胞用的什么培养基，可否推荐下参考文献？如何保持连续传代培养？......组织块法我也做过，比较的话，我还是选择了消化法，我使用的方法贴壁率还是挺好的，细胞活性也很好的。IMMORTECH的培养基。我不会发附件，您看下图片。关注CR技术！

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dxy_h2lc4whq

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lixingde胶原酶有很多分型，不同分型对消化影响大吗？做了几次口腔癌原代培养，用的1型胶原酶，结果养出来的细胞大部分是成纤维细胞，肿瘤细胞贴壁很少，大家遇到过这种情况吗？怎么判断是成纤维细胞还是自己需要的癌细胞？

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goodyezi

用户

dxy_h2lc4whq怎么判断是成纤维细胞还是自己需要的癌细胞？这两种细胞的形态是完全不同的。一种是拉长一点的纤维状，另一种是上皮样的，铺路石状

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13996216469W

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楼主，我最近也在提原代肝癌细胞，我用的组织块法，可是我的半个月了都没有爬出来，反而组织块周围有很多点点样的东西，不是细胞，请问楼主用过组织块法提过么？

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goodyezi

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lixingde胶原酶有很多分型，不同分型对消化影响大吗？做了几次口腔癌原代培养，用的1型胶原酶，结果养出来的细胞大部分是成纤维细胞，肿瘤细胞贴壁很少，大家遇到过这种情况吗？一般用胶原酶四

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zzuzks

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楼主你好，最近需要养食管癌的原代细胞，能否留个联系方式，以便沟通

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goodyezi

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zzuzks楼主你好，最近需要养食管癌的原代细胞，能否留个联系方式，以便沟通已经私信你。

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小医生韩小徽

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展开引用goodyezi近期根据经验总结了原代肿瘤细胞分离培养的2个关键因素。1、组织的活性：如果我们取的都是坏死的组织或者结缔组织，我相信任何方法都不可能分离出来活的细胞的。另外，取完的组织要冷藏存放，并且越早分离越好，最好在24h内，最久不要超过48h。2、组织的消化：在组织消化前，组织剪的越碎越好（1mm3左右为宜），组织的大小决定了组织的消化时间，不同组织消化时间差别较大：例如肺癌在2h-2.5h；食管癌在1个多小时。希望可以帮到各位研友，另外如果大家有更好的经验可以一起......楼主，我近期要从手术室拿胃癌标本做原代细胞分离，想使用消化法。手术室距离实验室10分钟路程，希望咨询转运标本和分离所需试剂，和步骤情况。能不能留一个联系方式啊，**

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windzas

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楼主，我近期要做胃癌原代细胞分离和培养，能留个联系方式，想咨询下操作步骤和需要的试剂，谢谢。

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windzas

用户

展开引用小医生韩小徽楼主，我近期要从手术室拿胃癌标本做原代细胞分离，想使用消化法。手术室距离实验室10分钟路程，希望咨询转运标本和分离所需试剂，和步骤情况。能不能留一个联系方式啊，**......请问，你的胃癌原代细胞培养成功了吗？

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UchihaItachi520

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楼主大大，最近在养原代肺癌和乳腺癌细胞，可否加你一个联系方式请教下呢，谢谢