人类血液细胞分离与培养
2016-05-27
问题描述:
各位师兄师姐:
我近期负责的课题,需要进行人类血液淋巴细胞和DC细胞的分离和培养,但我在方面懂的不多,想求助这方面的大神们。后续我需要做RT-qPCR,western-blot、免疫荧光等实验,我应该去多少ml全血比较好?全血怎么保存?怎么进行分离?后续怎么培养和保存?
谢谢!
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mary055
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全血,一般我们Ficoll分出PBMC(外周血单个核细胞),1ml血理论上可以分出10^6个PBMC,单核细胞(CD14+)一般占全血的10%左右,一般放在48孔板里面养,FBS预铺板,然后种磁珠分出来的CD14细胞,加入诱导因子,最后LPS刺激。如果提RNA,买微量RNA提取试剂盒,10^5个数量级就够了。WB没做过,不懂。全血不好保存,一般我们都是24小时用掉。PBMC一般也不冻存,凋亡率太高了。普通测测流式提提RNA,养DC随便5ml或者10ml血就够了,WB不懂。淋巴细胞你说的太宽泛了,不造到底啥
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baichimao
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我是想分离B淋巴细胞并进行培养,但我后续需要这细胞进行的实验有点多,我看文献上有人会转染病毒使它可以无限扩增····你能告诉我一下B淋巴细胞的培养方法吗?谢谢!
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melody敏
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你好,有人血单个核细胞的具体方法么?
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