【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验

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【求助】求小鼠睾丸支持细胞分离经验

2013-08-20

问题描述：

各位前辈，我现在要分离小鼠睾丸支持细胞进行培养，但是做了三次都没有贴壁，不知道问题出在哪，**指导！！！
我的步骤：
1、16－22天小鼠颈椎脱臼法处死后，75%酒精浸泡30秒消毒，睾丸取出后置预冷PBS，40分钟（路上所需时间）后开始处理。
2、剔除白膜，剪碎睾丸。0.25%胰酶（含edta）1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟，等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟，过200目网筛，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS5ml重悬后转如培养瓶，入孵育箱37°C5%CO2培养。
请教各位，我到底是哪里有问题，是胰酶消化的时间长了吗？

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hxy0022

用户

今天培养48小时，终于看到贴壁的了，只不过数量少，也算是有点欣慰了。

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zlh514559404

用户

我也打算做支持细胞、、用买的细胞株做怎样、、会不会对实验结果有影响、、、求大虾指点啊、、

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hxy0022

用户

我是自己分的呢，买的就不需要鉴定了，后续实验有待跟进

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毒理zyt

用户

我也在做这个实验，有许多想请教的，我的qq352514121,希望各位大师能够帮我一下，谢了版主cheff0412留言:请不要公开个人联系方式，建议私下PM

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lilian3719

用户

消化时间有点长了，观察消化时有细线状的曲精细管游离出来，再过五分钟就差不多了。我觉得最多30分钟，我一般20几分钟，也许支持细胞少，但损伤小，容易存活贴壁。希望有用。

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ziqixiaoying

用户

展开引用hxy0022各位前辈，我现在要分离小鼠睾丸支持细胞进行培养，但是做了三次都没有贴壁，不知道问题出在哪，**指导！！！我的步骤：1、16－22天小鼠颈椎脱臼法处死后，75%酒精浸泡30秒消毒，睾丸取出后置预冷PBS，40分钟（路上所需时间）后开始处理。2、剔除白膜，剪碎睾丸。0.25%胰酶（含edta）1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟，等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。3、加0.1%胶原酶消化30分钟，过200目网筛，1000r/MIN离心5分钟，弃上液。4、DMEM/F12含10%FBS5ml重悬后转如培养瓶，入孵育箱37°C5%CO2培养。请教各位，我到底是哪里有问题，是胰酶消化的时间长了吗？......请问你后来原代SC细胞做的怎样？我最近做了大鼠Sertoli的分离，第一代长的很好，传代后贴壁性变差，少量贴壁的培养5天也未见增殖，可否帮忙分析下原因，顺便看下细胞形态（第一张图为原代细胞，第二张为第二代生长2d的形态）是否正确。多谢

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hxy0022

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你分的是支持细胞的形态，要做鉴定的，我是用的FASL鉴定的。这种自己分离的细胞最多养一个月就不行了。

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灰姑娘sunshine

用户

我也在做小鼠睾丸支持细胞分离培养，感觉你应该是消化的时间太久了，支持细胞中还有其他的生精细胞怎么去除？

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灰姑娘sunshine

用户

展开引用ziqixiaoying请问你后来原代SC细胞做的怎样？我最近做了大鼠Sertoli的分离，第一代长的很好，传代后贴壁性变差，少量贴壁的培养5天也未见增殖，可否帮忙分析下原因，顺便看下细胞形态（第一张图为原代细胞，第二张为第二代生长2d的形态）是否正确。多谢......你的分离步骤是怎么做的？我现在正在做,求指教，谢谢

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灰姑娘sunshine

用户

zlh514559404我也打算做支持细胞、、用买的细胞株做怎样、、会不会对实验结果有影响、、、求大虾指点啊、、你的支持细胞在哪买的呢？

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