干细胞的分离纯化实验一组织消化法
| 实验步骤 | 组织消化法实验材料及试剂①眼科弯剪、组织镊、筛网(200目)；②培养皿、培养瓶、离心管、吸管；③D-Hank缓冲液高压灭菌，4℃：保存；④胰蛋白酶或胶原酶；⑤完全培养基；⑥实验动物。 操作方法(1)将组织块置于无菌培养皿中，用Hank缓冲液或无血清培养液漂洗，洗去血污，对于内脏组织要剥去外包膜。 (2)用眼科弯剪将组织剪成1〜2mm3左右的小块。在剪切过程中，可以适当向组织上滴加少许培养液，以保持组织块的湿润。 (3)根据组织的不同加入相应浓度的消化液，置于最佳消化条件下对组织进行消化处理。要注意在消化过程中要随时吸取少量消化液置于显微镜下观察，如组织已经分散成细胞团或单个细胞就要终止消化。 (4)将消化液过200目筛网，以去除组织块。剩余的大块组织可继续加人新鲜的消化液继续消化，以获得足量的目的细胞。 ⑶将已过滤的消化液置于离心管中，离心后，加入适量的D-Hank缓冲液或培养基重悬细胞，充分打散为单个细胞悬液，洗一二次后，细胞计数，接种于培养瓶或培养皿中，置5%C02、37¾培养箱中进行培养。 注意事项不同的器官、组织，其组织胚胎学结构不一，例如，心肌细胞或平滑肌细胞如采用剪切的方法则容易将细胞损伤，在此情况下则需采用剥离加酶消化的方法。 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2021-07-20
阅读（162）
▍
相关分类
▍
相关文章
