分离防御素
1．试剂：30％的醋酸，3只spectra/por管，HNP－3多克隆抗体，液氮2．器械和设备：超声破碎仪，离心管，离心机，4度的冰箱，bicinchoninic酸蛋白测定系统，液氮仪，S－200HR柱，S－200HR柱，tricineSDS-PAGE,AU-PAGE及激光测定取来在COPD病人50毫升脓痰液超声破碎3次，1分每次（幅度？）30％的醋酸定容至100毫升，置于4度的冰箱中浓缩过夜离心，27000转，20分钟（去除杂质）真空蒸汽泵浓缩至10毫升（时间？）5%醋酸溶于3只spectra/por管中，置于4度的冰箱中过夜(用against而不用with？)提取物离心540转，10分钟上清夜用S－200HR柱进行凝胶过滤（2.5×100cm，滤前用5％的醋酸平衡）收集10毫升滤液兔子抗HNP－3多克隆抗体进行ELISA（鉴定是否存在defensins）使用SDS-PAGE纯化（减少的情况）12.5%酸环境的AU-PAGE使用真空泵浓缩用bicinchoninic酸蛋白测定系统对浓缩蛋白进行测量液氮中嗜酸性粒细胞崩解离心去除细胞碎片(转速？时间？)postnuclear上清夜离心27000转，20分钟加入5％的醋酸溶液形成颗粒提取物用S-200HR柱（4.8×105cm）过滤（时间？）含有HNP-3的部分使用RP-HPLC作进一步的纯化(柱C18，4.6*250mm)沉淀使用tricineSDS-PAGE,AU-PAGE及激光测定使用Limulus测定defensins中LPS成分（HNP－1，2，3大约100微克每毫升，呼吸道细胞100匹克每毫升
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发布于 ： 2021-08-14
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