材料：DMEM培养基(GibcoBRLCo生产)，无糖DMEM培养基(GibcoBRLCo生产)，NRKSIE鼠。肾小管细胞株(购于华西医科大学内科实验室)，乳酸钠(国产分析纯试剂)。方法肾小管细胞培养NRKSIE鼠肾小管细胞用0．25%胰蛋白酶消化，将小管细胞分离成单个细胞悬液，用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基，于37℃5%(体积分数)CO2孵箱中培养。每24h更换培养液一次，培养2～3d，待细胞生长成片备用。实验将细胞转种于96孑L板，细胞密度为lO·mL，孵育24h。培养液中加入H202，浓度为5mmol/L，作用30min。讨论：肾小管氧化性损伤在肾脏的缺血一再灌注损伤和中毒性损伤中起着重要作用。为了从细胞水平阐明活性氧自由基对。肾小管细胞的作用，本实验用5mmol/LH202建立了肾小管氧化性损伤模型。H202虽不是自由基，但它属活性氧类，有高反应性，可促进自由基的生成，引发生物膜的脂质过氧化反应，导致细胞的坏死和凋亡。一般情况下，生物体内H202常被酶系统所清除，如过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶。在过氧化氢复制的肾小管氧化性损伤的模型中，细胞的损伤非常明显，表现为细胞存活率降低，细胞膜完整性破坏，LDH释放增加，线粒体肿大，溶解明显增多，数目减少，细胞的脂质过氧化产物MDA含量增高。利用培养。肾小管细胞复制氧化性损伤模型避免了全身神经体液、激素水平及局部不同类型细胞间的相互影响，为更深入地从细胞水平研究。肾脏疾患提供了良好的模型。但由于实验所用的肾小管细胞株，在体外培养的过程，其膜表面结构、细胞器(如线粒体)、酶活性等与原代培养的人肾小管细胞可能存在一些差异，且该模型不能从血流动力学的角度反映。肾小管细胞的功能。因此，培养的肾小管细胞氧化性损伤模型必须与在体模型结合起来，相互补充。 相关动物及产品:
