酵母遗传学方法7：随机孢子分析
随机孢子分析 1）孢子形成 1．挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在YPD平板上，尽可能把细胞涂薄一些，在30℃下培养12～16小时，超过16小时将明显降低孢子的形成率。 2．上午，用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞，转到含有2.5ml产孢培养基试管中，在25℃下旋转振荡培养。 3．用光学显微镜检测孢子形成情况。要使5％以上的细胞形成孢子需花2～10天。 2）随机孢子 4．取1ml形成孢子的培养物转到15ml的锥形聚苯乙烯离心管，用医用离心机离心5分钟沉淀细胞。 5．彻底除去上清液，把细胞悬浮在0.2ml无菌水和5μlβ-葡糖苷酸酶（约500个单位）。 6．在30℃条件下旋转振荡培养1小时。 7．加0.1ml（约0.15克）灭菌的0.5mm玻珠，在30℃条件下旋转振荡培养1小时。 8．加1ml无菌水。 9．振荡1～2分钟，用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。 10．加4ml无菌水。 11．用无菌水做10－1～10－3稀释度，在含有60μg/ml刀豆氨酸的SC－arg平板上涂200μl。
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发布于 ： 2018-12-26
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