酵母遗传学方法4：质粒DNA的羟基突变
质粒DNA的羟基突变 1．临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。 2．将用氯化铯纯化的10μg质粒DNA加到含500μl羟胺溶液的微型离心管。 3．在37℃下培养20小时。 4．加入10μl的5mol/LNaCl、50μg1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml无水乙醇终止反应，置－70℃沉淀DNA10分钟。 5．离心10分钟，小心弃去所有上清液，收集DNA。 6．将DNA悬浮于100μlTE缓冲液（pH8）中，再加入10μl3mol/L的醋酸钠和250μl的无水乙醇，在－70℃下放置10分钟，重复步骤5，收集DNA。 7．让沉淀自然干燥，再悬浮于100μlTE缓冲液（pH8）。 8．该DNA可直接用于大肠杆菌或酵母的转化。诱变DNA与非诱变DNA相比，酵母的转化频率相对降低约3倍。在大肠杆菌中，Ura－质粒可被检出。
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发布于 ： 2018-12-26
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