酵母遗传学方法2：蛋白质的抽提
酵母蛋白质的抽提 此法抽提的酵母蛋白适用于SDS凝胶电泳和Western印迹分析。 1．从OD600＝2的细胞培养物中抽提酵母蛋白质。培养物的一种简单制备方法是将细胞接种到5mlYPD中，过夜培养后获得指数培养物（OD600＝0.5～2.0）。 2．在水浴上把OD600＝2的细胞培养物转到含有2ml的50mmol/LTris-HCl(pH7.5)、10mmol/L叠氮化钠溶液的13mm离心管中，用吊篮式医用离心机离心沉淀细胞。 3．用25号针头吸出上清液，再用30μlESB缓冲液悬浮细胞。 4．快速转入微型离心管，在100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活之后，样品存放于－20℃。 5．加入0.1g的0.2mm的玻珠，或装入玻珠直至液体刚好浸没，剧烈振荡混合2分钟。 6．加入70μlESB缓冲液，稍加振荡，置100℃保温1分钟。 ESB缓冲液（可在4℃贮存数天）： 2％SDS 80mmol/LTris-HCl(pH6.8) 10%甘油 1.5％二硫基苏糖醇（DTT） 0.1mg/ml溴酚蓝 7．取5～20μl抽提液上样进行SDS凝胶电泳。
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发布于 ： 2018-12-26
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