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酵母菌落直接质粒转化法
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酵母菌落直接质粒转化法

1.用牙签从平板中挑取单菌落(直径23mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。

2.10μl载体DNA100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“miniprepDNA”方法制得,则不需加载体DNA)。

3.0.5mlPLATE溶液,振荡。

PLATE溶液:

40%聚乙二醇(PEG,分子量3350SigmaP3640

0.1mol/L醋酸锂

10mmol/LTris-HClpH7.5

1mmol/LEDTA

4.置于实验台上,室温培养4天。

5.42℃下热激15分钟。

6.800010000r/min离心10秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。

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