酵母菌落直接质粒转化法
酵母菌落直接质粒转化法 1.用牙签从平板中挑取单菌落(直径2~3mm),转移到1.5ml的无菌离心管中。 2.将10μl载体DNA(100μg)与10μl转化质粒DNA混合,振荡均匀。(若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini-prepDNA”方法制得,则不需加载体DNA)。 3.加0.5mlPLATE溶液,振荡。 PLATE溶液: 40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;SigmaP3640) 0.1mol/L醋酸锂 10mmol/LTris-HCl(pH7.5) 1mmol/LEDTA 4.置于实验台上,室温培养4天。 5.置42℃下热激15分钟。 6.以8000~10000r/min离心10秒沉淀细胞,小心弃去上清液,将细胞轻轻悬浮到200μl无菌蒸馏水,使细胞悬浮均匀,再直接将混合液涂选择平板。
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发布于 : 2018-12-26
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