细胞转染,有许多孔的细胞死了,什么原因?
2021-07-27
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lxc1005
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qingwudarao heck293细胞,铺完板后,一共七块24孔板。发现有两块板的其中两个孔变黄,然后用脂质体试剂转染质粒(质粒浓度1600ng/ul)后细胞,溶液没有变黄。(一般正常情况下都会变黄)没变黄的孔里的细胞都没了。。。什么原因呢我也在弄这个,293的种可不可以分享一管?或者卖我一管
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lxc1005
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lxc1005我也在弄这个,293的种可不可以分享一管?或者卖我一管lxc1005我的微信
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hulalahulala
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我遇到了和你一样的情况,也是24孔板,不过我的是C3H10细胞系,感染了病毒的孔细胞慢慢的由中间像周围扩散死掉了,空白组长得好好的,培养基没有变色,没有染菌。现在你的问题解决了吗,求分享!
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dxy_p1qkcyl5
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⑴第一天按实验需要将细胞铺板(比如24孔板)。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃培养过夜。⑵准备DNA-培养基-Polybrene混合液(具体加入方法与慢病毒转染相同)。⑶去除培养基,在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液,在37°C孵育细胞6-20h。⑷去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSOshocksolution(15%DMSOin1XHBSS)轻轻盖住细胞(60mm培养皿3ml,100mm培养皿4ml)。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s,使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞4min。⑸立即去除DMSOshocksolution,用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗,100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。⑹加入完全培养基到细胞中,根据需要进行后续实验。详情情可以去http://www.hanbio.net/cn/products/item/12094看看
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蓝色轮旋曲
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hulalahulala我遇到了和你一样的情况,也是24孔板,不过我的是C3H10细胞系,感染了病毒的孔细胞慢慢的由中间像周围扩散死掉了,空白组长得好好的,培养基没有变色,没有染菌。现在你的问题解决了吗,求分享!我也是的!C3H10转染了慢病毒,以前都是好的,最近复苏了两支做实验都是由中心向四周翻卷起来,我是成骨矿化诱导的,矿化到3、4天就会出现。尝试过铺0.1%明胶的两板12孔对照没有铺的就没卷起来,但是按道理不应该这样,以前诱导28天都没问题!!请问是确定凋亡么?我以为是细胞增殖要快的原因。
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