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Altogen/MG-63 Transfection Kit (Osteosarcoma, CRL-1427)/1.5 ml(Catalog #6849)
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Altogen/MG-63 Transfection Kit (Osteosarcoma, CRL-1427)/1.5 ml(Catalog #6849)
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Transfection Reagent for MG-63 Cells (Osteosarcoma Cells, CRL-1427)

  • Two component formulation enhances lipid mediated transfection efficiency
  • Optimized easy-to-use transfection protocol provided for transfection of siRNA, DNA, mRNA, and microRNA
  • High transfection efficacy in the presence of serum
  • Expand your RNAi application with a reagent optimized for delivery of both siRNA and plasmid
  • Reproducible transfection results
  • Works well for standard reverse transfection and high-throughput applications
  • Download in vitro MG63 transfection protocol: [PDF]
  • Download MG63 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
  • Download PowerPoint presentation for NIH3T3 transfection kit: [PPT]
  • Developed and manufactured by Altogen Biosystems

Transfection Efficiency:

Reagent exhibits at least 77% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.

Transfection Protocol and MSDS:

Download Altogen Biosystems MG-63 Transfection Protocol: [PDF]

Download MSDS: [PDF]

MG-63 Cell Line:

Sarcoma is a cancer of bones and connective tissues that is quite rare in adults. However, it comprises approximately 20% of all childhood cancers, as indicated by the Sarcoma Foundation of America (SFA). Human cell lines are valuable preclinical models for sarcoma research as well as for evaluation of the efficacy or toxicity of potential drug candidates. The MG-63 cell line was established from the bone tissue of a 14-year-old Caucasian male with osteosarcoma. This cell line exhibits fibroblast morphology and shows high levels of interferon production when induced by cycloheximide, actinomycin D, and polyinosinic-polycytidylic acid. These MG-63 cells express TGF-beta RI and TGF-beta RII receptors and could be useful as a transfection host in different types of biomedical research applications. The MG-63 cell line is hypotriploid with a modal chromosome number of 66. Altogen Biosystems provides high-efficiency transfection reagent kits for the MG-63 osteosarcoma cell line.

Data:

MG63 Transfection Reagent

Figure 1. siRNAs targeting Lamin A/C mRNA or non-silencing control siRNA were transfected into MG63 cells following the recommended protocol. At 48 hours post-transfection the cells were analyzed by qRT-PCR for Lamin A/C gene expression levels. 18S rRNA levels were used to normalize the Lamin A/C data. Values are normalized to untreated sample. Data are means ± SD (n=4).

MG63-cells-transfection-protocol

Figure 2. Protein expression of Lamin A in MG-63 cells. DNA plasmid expressing Lamin A or siRNA targeting Lamin A were transfected into MG-63 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.

MG63 Transfection Reagent citation references:

  • Data Brief. 2016 Jun; 7: 177–182. Data supporting attempted caveolae-mediated phagocytosis of surface-fixed micro-pillars by human osteoblasts. Moerke et al [PDF]

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MG-63 Transfection Kit

Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems provides pre-optimized transfection kits and electroporation products for life science research. Transfection products are developed for individual cancer cell line and transfection protocols are optimized to enable high transfection  efficiency of biomolecules. Altogen Biosystems developed in vivo delivery products for small animal research, mouse and rat targeted tissue delivery: liver targeted, pancreas targeted, kidney targeted, PEG-Liposome-, Nanoparticle-, Lipid-, and Polymer-based in vivo transfection kits. Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of biomolecules. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.

Altogen Labs Research Services:

Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).

Volume Options:

  • 0.5 ml (Catalog #6848)
  • 1.5 ml (Catalog #6849)
  • 1.5 ml CRISPR (Catalog #2173)
  • 8.0 ml (Catalog #7063)

AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。 


Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒


120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。

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各位版友求助,

我使用Hek293构建转染模型,瞬转5质粒,用lipo2000做转染体系。

转染48h,发现荧光较强的细胞都在爬片的边缘,比例十分少。是因为我添加试剂的手法不对吗。

同时也发现加入转染体系后细胞状态特别差。想问一下用lipo2000时可以用无双抗的10%FBSDMEM吗。我转染前6h现在用的是纯DMEM,不含FBS。


请各位大神帮忙

最近在做movas转染siRNA,用的是lipo2000,siRNA终浓度100nM,转染时细胞密度60%,80%,90%都尝试过,转染后6h换液,24h提RNA,效果一直不好,最好的时候沉默效率60%左右,非常崩溃

我刚开始做转染,悬浮细胞,分别做过表达和敲减,看了很多文献,大都没有提及转染后是用转染的这同一批细胞同时做pcr,wb,cck8,凋亡,细胞周期;还是说这次转染只做pcr或wb,再转染一次做cck8或细胞周期。剩下的功能试验均同前,转染一次做一次?我养的是悬浮细胞,转染后做cck8这些功能试验前需要离心换液吗?跪谢解答!

细胞转染的详细过程123
dppezmiu2017-10-02
您好,现在这个行业发展的不错,生物实验技术外包也会跟着发展,比如一些高校或者企业部分实验不想自己内部开展,或者涉及的设备比较昂贵,技术要求高,都会寻求外包。但是现在竞争也比较大,的得看单位这边整体做的怎么样。
其次要看下你选择单位的规模如何,上海这边的,你可以看下基尔顿生物,原代细胞培养,动物造模,整体课题外包。
质粒转染细胞后多久能提RNA做PCR
实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了:
1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。
2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的,并没有刻意用转染级的,因为转染量大,去内毒素的操作太麻烦,损失太大。
BV2细胞用什么方法做转染123
风雨gHY22A2021-07-21
BV2细胞用什么方法做转染
悬浮细胞的转染方法:(以下内容转自生物帮资讯)
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
可能有多种原因:目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;细胞贴壁转染之后没有正常换液。建议: 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统; 摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection; 对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV,(2)rAAV的低产出,(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中,rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外,有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。
细胞转染GFP质粒并进行表达之后,一般细胞内会有大量的GFP蛋白,可以发出绿色荧光。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
需要连接到载体上才能转染受体细胞,载体可能是质粒或者病毒

求助:本人现在做细胞转染,具体实验包括转染目的基因后测MTT,凋亡,侵袭等水平差异,现在有个疑惑,如果MTT结果是促进增殖,那凋亡或侵袭结果的意义是否受其影响,比如同样数量细胞里这个组的凋亡少是否其侵袭能力就强,结果是凋亡少造成的还是有协同作用,如何避免干扰,还有转染后凋亡检测时间的选择,因为不是做的药物而是转染,应如何设置时间,78小时是否有意义?问的有点多,求大家耐心指导