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FormuMax/Liposomes for Loading Hydrophobic Drugs (5.0mL)/F10209D
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FormuMax/Liposomes for Loading Hydrophobic Drugs (5.0mL)/F10209D
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liposomeexpert
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PEGylatedLiposomes for Loading Hydrophobic Drugs (100nm,5.0 mL)

This pre-formed liposome product is created for post loading of hydrophobic small molecule compounds into liposomes. The process of drug incorporation is very straight-forward. Then simply add an aliquot of drug solution (prepared in a water-miscible solvent such as ethanol, DMSO and etc.) into the liposome suspension. The drug molecules can be incorporated into the lipid bilayers by the nature of hydrophobic interactions. The drug solubility therefore could be significantly enhanced. Liposomal drug concentration of 1-2 mg/mL could be achieved for most lipophilic drugs. PEGylation of the liposomes provides not only better formulation stability but also the potential of achieving prolongedin vivoblood circulation. The finished drug loaded formulations are suitable for either in vitro testing or in vivo studies.

Specifications

Lipids:Phosphatidylcholine and mPEG2000-DSPE (95:5 mol%)

Total lipid content.: 220 mgs in 5 mL

Lipid concentration: 50mM

Mean particle size:100 nm (90-120 nm)

Buffer solution:PBS pH7.0 – 7.4 (phosphate buffered saline)

Shelf-life: 6 months stored at 2-8 °C (guaranteed for non-drug loaded, replacement only)

Instructions

Method of Drug Loading

1. Prepare a concentrated drug solution (20-50x of the final targeted drug concentration) in a water-miscible solvent, such as ethanol, DMSO and etc.2.Aliquot out appropriate amount of the above reconstituted liposomes into a container suchas a 15 mL centrifuge tube3. Pre-warm the liposomes to 45-50°C in a water bath4.To the liposome solution, slowly add appropriate amount of the above drug solution(preferably using a positive displacement pipette for good accuracy) to the liposome solution while vortexing at medium speed5. Incubate drug/liposome mixture in the water bath with frequent mixing for 60 min6. The drug loading is completed.

Additional Information

1. Keep the final solvent content below 5%, since too much solvent may affect the integrity of the liposomes2. The solvent in the final formulation could be removed by dialysis or gel filtration column if necessary3. The final formulation could be sterile filtered for long term storage4. Some drugs post loading may gradually crystalize out over time, so it is advised to monitor the stability of the drug-loaded formulations5. The drug crystals can be monitored under optical microscope, though a more reliable analytical assay, i.e. HPLC, is desired6. The turbidity may increase slightly due to the incorporation of the drug. But if it becomes significantly cloudy, it may indicate the drug is over loaded.Reduce the drug/lipid ratio if this happens.

Drug Loading Optimization

1. The capacity of the liposomes for the hydrophobic drug loading really depends on the nature of the drug, so optimization is necessary to determine the maximum drug loading capacity.2. Conduct drug loading in small volumes at a series of increasing drug/lipid ratios3. The pH may also affect the drug loading, use a pH at where the drug is the most lipophilic, but keep in the range of 4-84. Observe the presence of drug crystals under microscopy and/or by centrifugation to pellet down the drug crystals5. Identify the maximum drug/lipid ratio at which no or minimal drug crystals seen6. It is recommended to monitor the stability for a period of time, because drug may crystalize out over time7. Conduct the final drug loading at or below the maximum drug/lipid ratio determined.


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FormuMax供应主要产品:

Clophosome-氯膦酸盐脂质体

FormuMax提供两种预埋有氯磷酸盐分子的中性脂质体产品,该产品单次静脉或腹腔注射后可在脾脏经巨噬细胞清除率可达80-90%,并具有高度活性、稳定的理化性质(长期冰箱存放后仍保持均一性及悬浮特性),粘滞度低使用简便,适用于静脉、腹腔、皮下、鼻腔、气管等多种方式给药。

Doxoves-盐酸多柔比星脂质体

FormuMax可提供脂质定制的盐酸多柔比星脂质体(定制内容为脂质成分及脂质体大小)。FormuMax提供的产品为Doxoves,具有高度的产品稳定性和一致性,紧密的粒径分布和高效的药物包埋效率(高达4.0mg/mL(40mMlipid)的包埋药物浓度)。Doxoves系列产品在产品特性、稳定性及药代动力学特性上可媲美商业产品Doxil。

DrugLoadedliposomes

FormuMax提供多款包埋活性药物的脂质体产品,包括DoxorubicinHCl(含2.0mg/mL及4.0mg/mL两种浓度),IrinotecanHCl(2.0mg/mL),TopotecanHCl(2.0mg/mL),产品线仍在持续更新中。

预制脂质体

FormuMax供应的预制脂质体产品囊括多种通用的脂质体类型,使用世界*的优质脂类原料。该系列产品易于使用,稳定性、可靠性及可重复性高,节省时间和成本,并可为研究人员提供定制脂质体服务。目前FormuMax提供聚乙二醇化/非聚乙二醇化的常用脂质体,以及含浓度梯度Ammonium的脂质体

阳离子脂质体

FormuMax供应一系列的阳离子脂质体,用于需带正电荷的脂质体或细胞转染质粒DNA、反义/干扰RNA等。

荧光脂质体

FormuMax供应预制荧光标记的脂质体,包括常规荧光脂质体、生物素化的荧光脂质体以及Avdinized化的荧光脂质体,另外还提供客户定制的荧光脂质体(脂类及染料可选)。

脂质体制备薄膜

FormuMax供应一系列不同规格的聚碳酸酯薄膜,用于脂质体挤出制备。



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细胞转染GFP质粒并进行表达之后,一般细胞内会有大量的GFP蛋白,可以发出绿色荧光。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级,因此只要这个结构仍然保持着,就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定,一些版本的GFP蛋白(如EGFP)甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性,因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的,一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构,即便细胞被固定了,仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。
用siRNA转染A375细胞,我看到好多说这个细胞转染效率很低,求转染效率高的转染试剂!!
转染试剂有的毒性很大,要准时换液。可以换个低毒性的试试。或者你转染的东西有致死性。
细胞转染 实验方法 123
一直攀爬的蜗牛2021-07-31
本人最近正在做质粒DNA的293T细胞转染,请问各位大神,有没有用过sigma的转染试剂,我们实验室买了,但是是凝胶状,不知道怎么用,请指教!

用lip3000转染HAC15细胞,目的把质粒转入细胞,现阶段把带EGFP的质粒转进去就难,荧光显微镜下荧光很少,可以数清,按照lip3000说明书转染的(剂量有适当调整),求转染高手指点方法!!


可能有多种原因:

目标蛋白对细胞有毒性,导致细胞死亡;
转染试剂以及DNA用量信息需要优化,否则对细胞具有伤害;
细胞贴壁转染之后没有正常换液。
建议:考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统;摸索转染试剂以及DNA用量信息,如果转染试剂毒性太大,可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection;对转染后的细胞进行换液处理,如果细胞状态感觉不够理想,可以考虑添加一些血清来帮助细胞恢复健康。
以上所有分析、建议的前提是,细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利,加油~
请教做过DNA 脂质体法转染细胞的高手
DXY721认为:
悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大,主要差别在于转染后的筛选,当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。
其实转染的过程很简单,问题是能不能转的进去的,转染率能有多少,转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。
我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染,说明书上都有具体的操作过程,将脂质体和目的基因按比例混合,然后加到细胞悬液里就OK了,说的简单,实际上还是有一些细节要注意的,比如脂质体和目的基因混合的比例,转染的细胞数,细胞的代数,细胞的状态,有的还要求在转染的前一天传代一次,不过不要怕,这些在脂质体说明书上都有明确的说明,按照说明书做就可以了。
jinghuanlv认为:
悬浮细胞和贴壁细胞转染还是有很大不同的。
脂质体转染的原理基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。
我们实验室转染悬浮细胞是用的电穿孔法,目前为止,悬浮细胞转染的最好方法还是电转,我们实验室用的电转仪是Bio-Rad的,使用条件是电压250V,电容975uF,效果不错,不妨一用。
细胞 (英文名:cell)并没有统一的定义,比较普遍的提法是:细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成,但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说,细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成,即单细胞生物,高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类,但也有人提出应分为三类,即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微,在显微镜下始能窥见,形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成,表面有细胞膜。高等植物细胞膜外有细胞壁,细胞质中常有质体,体内有叶绿体和液泡,还有线粒体。
可以。常用脂质体转染法。

脂质体是磷脂分散在水中时形成的脂质双分子层,又称为人工生物膜。
阳离子脂质体表面带正电荷,能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内,形成DNA一脂复合体,也能被表面带负电荷的细胞膜吸附,再通过膜的融合或细胞的内吞作用,偶尔也通过直接渗透作用,DNA传递进入细胞,形成包涵体或进入溶酶体 其中一小部分DNA能从包涵体内释放,并进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。

heck293细胞,铺完板后,一共七块24孔板。发现有两块板的其中两个孔变黄,然后用脂质体试剂转染质粒(质粒浓度1600ng/ul)后细胞,溶液没有变黄。(一般正常情况下都会变黄)没变黄的孔里的细胞都没了。。。什么原因呢

转化(transformation)、转导(transduction)、转染(transfection)和感染(infection)是分子生物学实 验中将外源基因导入受体细胞的4 种技术,它们词形相近,概念上容易混淆。
“转化”是指含外源基因的重组质粒(载体)将外源基因直接导入原核细胞(如细菌);
“转导”指通过重组病毒载体将外源基因导入真核细胞或原核细胞;
“转染”指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞;
“感染”在基因转移实验中强调重组病毒载体入侵受体细胞的过程。
在使用这4 个名词时, 应仔细分析基因转移实验的四要素——转移物、载体、介导方法、受体细胞类型,而正确区 分载体和受体细胞类型是辨析的关键点。当载体是重组质粒时,如受体细胞是原核细胞应使 用“转化”,如受体细胞是真核细胞则使用“转染”;当载体是重组病毒时,如强调转移物进 入受体细胞应使用“转导”,如强调重组病毒载体进入受体细胞的过程则使用“感染”。

HAC15细胞转染,目前用的lip3000、lip2000都用过,不知道是试剂剂量使用问题,还是购买试剂问题,荧光显微镜一个视野下好的有几个荧光,有得没荧光,没荧光,没荧光,求HAC15细胞转染用什么转染试剂转染效率高!!!