我的细胞比较脆弱,无血清时不能生长。我可以尝试在有血清的条件下转染吗?
与许多其他转染试剂相反,在自d清的环境下,jetPRIME'的效率更高。因此,转染复合物可以直接加到含血清培养基的细胞中。
比值
DNA/jetPRIME@的比值是什么意思?
该比值指的是每微克DNA相对应的jetPRIME@微升数。例如,DNA/jetPRIME*比值为1: 2意思是每微克DNA加2微升jetPRIME*.
在jetPRIME"转染的过程中可以使用抗生素吗?
jetPRIME'”的转染效率不受抗生索的影响。jetPRIME@的常 规批次质检都是在含血清和抗生索的培养基中进行的。
优化
如何提高转染效率?
优化的第1步是将DNA的最增加1.5倍。我们也推荐增加DNA/jetPRIME比值(每ug的DNA,2-3ul jetPRIME⑧)。另-一种方法是缓慢离心培养板(5 min at 210g)。
细胞密度
是否可以不在意细胞密度?
细胞密度和传代次数将影响转染效率。我们推荐细胞融合度在60%至80%。对于使用jetPRIME@的转染优化条件,请参见jetPRIME@转染说明书中的Table1,根据不同培养板推学的细胞数。此外,如果细胞已经培养很长时间(超过20代),我们建议从液氮中取的1管新细胞,重新进行培养。
细胞特异性
对于所有细胞可以使用相同的条件吗?
已优化的jetPRIME⑥操作步骤可用于多种细胞,例如A549,MCF7,U-2OS,NIH-3T3,B16-F10,Caco-2等。但是,我们也提供了针对具体缃胞的特异性操作步骤,以便获得更高的转染效率。这些具体条件可以参见PolyplusCelltransfectionDatabase。
HEK-293和HeLa细胞
HEK-293和HeLa细胞:是否可以提供使用jetPRIME@转染HEK-293和HeLa细胞的具体建议?
jetPRIME@对于DNA转染HEK-293和HeLa细胞都是非常高效的。因此,我们推荐减少DNA的量(例如6孔板,每孔1μg至0.5μg),使用1:2的DNA和jetPRIME@的比例,
扩大
如何使用jetPRIME@扩大转染实验?
一般来说,DNA的量应该和总细胞数成比例。参考jetPRIME⑧protocol中推荐的,根据不同规格的培养皿,所需要的DNA和jetPRIME⑧的量(Table2)。
质粒共转染
当我想在一一个实验中进行多个质粒的共转染时,我该如何操作?
对于多个质粒的共转染,每孔DNA的总量不应超过说明15中标明的DNA量。每个质粒的比例根据质粒的大小、结构和期望的每个质拉的表达水平来应用。在每孔中,每个质拉至少应占总DNA量的10%。
复合物
jetPRIME@/IDNA复合物可以稳定多长时间?
复合物形成的15至30分钟内是获得最佳转染效率的时间。因此,对于需要较长孵育时间的高通量筛选实验,我们推荐使用jetPE@进行HTS,因为jetPEI@/DNA复合物可以稳定长达4小时。