细胞破碎和蛋白质溶解实验一匀浆法
| 实验方法原理 | 通过固体剪切力破碎组织和细胞，释放蛋白进入溶液。市售的匀浆器主要有四类，刀片式组织破碎匀浆器、内切式组织匀浆器、玻璃匀浆器和用于规模生产的髙压匀浆器。玻璃匀浆器的匀浆头（杵）有玻璃制的，也有特夫隆制的，既可以手动也可以电动。由于匀浆过程中蛋白质被蛋白酶降解的可能性较小，所以匀浆是简便、迅速和风险小的组织破碎方法，是实验室首先考虑的方法之一。 | ||||||||||
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| 实验材料 | 组织 试剂、试剂盒 | 缓冲液 仪器、耗材 | 匀浆器 实验步骤 | 1.用组织剪或芋术刀迅速将清洗的组织分离成适宜的小块，如1cm3； 2.每体积湿重组织通常加3～5倍体积预冷的匀浆缓冲液至匀浆容器内； 3.制备匀浆： 3.1电力驱动的玻璃匀浆器以500～1500r／min的速度，匀浆3～6次，每次5～10s。 3.2手动玻璃匀浆器匀浆10～20次。 3.3刀片式组织破碎匀浆器和内切式组织匀浆器以1000～3000r／min的速度，高速匀浆3次，每次20～30s，次间暂停几秒。 注意事项 | 1.玻璃匀浆器杵和臼之间的空隙应为0.35～0.70mm。电动玻璃匀浆器常用于匀桨肝、心、肌肉等软组织的匀浆；手动玻璃匀浆器常用于培养细胞和脑组织等的匀浆。 2.匀浆过程应注意维持低温。玻璃匀浆器可外置冰水浴，其他匀浆容器可预冷或在冷室内匀浆。 3.匀浆时所霈匀浆缓冲液的体积在不同条件下可有很大差别，有时甚至可为湿重组织体积的9～10倍。 4.匀浆的效果可以用相差显微镜观察组织细胞状况评估，也可定量单位湿重组织释放的蛋白质含量监控。 其他 | 展开 |
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发布于 ： 2021-09-07
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