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Gibco/Floor Plate Cell Expansion Kit/1 kit/A3165801
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Gibco/Floor Plate Cell Expansion Kit/1 kit/A3165801
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TheFloorPlateCellExpansionKitisacomponentoftheGibco™PSCDopaminergicNeuronDifferentiationKitthatisalsoofferedseparately.ItenablesadditionalexpansionoffloorplateProgenitorcellsgeneratedusingcompleteFloorPlateCellSpecificationMedium(partoftheDifferentiationkit).

Note:Eachadditionalexpansionbeyondpassage2willresultinanadditional4–6-foldincreaseinthetotalnumberoffloorplatecellswithoutcompromisingthequalityofTHneurons(positiveforbothTHandFOXA2).Furtherexpansion(uptopassage10)resultsinstableexpansionofprogenitorcells,buttheresultingTHneuronsmayshowdecreasedFOXA2expression.

ForResearchUseOnly.Notforuseindiagnosticprocedures.

Figures

Specifications

CellType:StemCells(Neural)
ProductSize:1kit
ShippingCondition:Dryiceandgelpack

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•1x500mLFloorPlateCellExpansionBase
•1x10mLFloorPlateCellExpansionSupplement
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Inordertorepeatapublishedexperiment,orhavesomeoneelserepeatyours,itisimportanttousethesamematerials.Fordevelopmentalstudies,thatmeansknowingtheprecisepointindevelopmentthattheembryoshavereached.Thetimeofincubationgivesonlyanapproximationofthedevelopmental 查看更多>
淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程的一个重要阶段。因此,检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。(来源:医学基础免疫学实验指导,主编金伯泉李恩善,第1 版,北京:世界图书出版社,1990) 查看更多>
一种名为“粒细胞集落刺激因子"的物质可以帮助心肌细胞大量增殖。 此前,科学家已经发现,“粒细胞集落刺激因子"可以刺激骨髓产生大量白细胞,用于治疗由化疗导致的白细胞减少。福田指出,这次的成果可能会把“粒细胞集落刺激因子"进一步推向再生医疗的前台。 老鼠胎儿在发育初期,心肌细胞会迅速增殖。福田对在母鼠子宫中发育了10天的老鼠胎儿进行了专门研究。他发现,这一时期老鼠胎儿体内的“粒细胞集落刺激因子"数量增加,于是猜测这种因子 查看更多>
Supplies:Ethanol 100 USP (highest quality)FACS Staining Buffer (1XPBS w/ 3 calf serum, 0.05 azide--filtered) —Dilute staining antibodies in BufferDNAse (Sigma 查看更多>
天津立博美华基因科技有限责任公司是CCK8细胞增殖实验服务技术服务商之一,从事CCK8细胞增殖实验服务已经多年。同时,生物在线为您提供众多企业CCK8细胞增殖实验服务技术服务,您可以搜索更多相关的CCK8细胞增殖实验服务实验技术服务,以便挑选到性价比高,合适的CCK8细胞增殖实验服务产品。而生物在线将会为您在CCK8细胞增殖实验服务方面提供全方位的解决方案。 查看更多>
CCK-8细胞增殖检测服务 CCK-8细胞增殖检测服务【相关服务:DNA测序】,DNA测序 8月2日,绿叶制药(02186.HK)母公司绿叶集团宣布收购新加坡基因测序公司Vela Diagnostics。这标志着绿叶集团正式进军精准医疗市场,而该公司的基因测序技术将与绿叶集团现有业务产生协同效应,形成从诊断到治疗的精准医疗全产业服务。绿叶集团人士告诉21世纪经济报道记者:“这家公司生产的设备、试剂已经拿到批文,接下来在国内注册就可以销售 查看更多>
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Nitrogen Bomb1) Harvest cells and wash 2 times with PBS.2) Resuspend final pellet in relaxation buffer. (20 ml/1X109 cells)3) Pressurize with N2 for 20 minutes 查看更多>
2月8日,国际学术期刊《生物化学杂志》(Journal of Biological Chemistry)在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所高大明研究组题为Extracellular Signal-regulated Kinases (ERKs) Phosphorylate Lin28a Protein to Modulate P19 Cell Proliferation and Differentiation 的最新研究成 查看更多>
阅读文档 5页 - 20积分 - 上传时间:2017年9月4日 the European Union (FP6 NeuroproMiSe) and the Brain Research Trust. SC is supporte... Immature dendritic cell exosomes suppres. preventive treatment w... 查看更多>
CCK-8较MTT法测定细胞增殖/毒性实验,步骤更简便,灵敏度更高,重复性更好第一 从基础操作方面对比 CCK-8 方法 MTT方法 1 还原后的甲臢物为水溶性,不需要溶解 还原后的甲臢物位非水溶性的,需要有机溶剂溶解 ... 查看更多>
Standard hybridization techniqueThe standard solution typically used for both pre-hybridisation and hybridisation is based on that given in Maniatis et al., (1 查看更多>
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请教BrdU检测细胞增殖的详细protocal,需要自己亲自做过这个实验的朋友帮忙,不1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片)

  由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,Mtb)引起的结核病是一种古老的慢性传染病,并且至今仍是全球死亡人数最多的单一传染病。据世界卫生组织(WHO)报道:2015年全球有1040万新发结核病患者,有180万人死于结核病。Mtb是一种胞内病原菌,可分泌多种效应蛋白至宿主细胞中,进而干扰细胞信号通路和生物学功能,最终促进病原菌在宿主细胞中的存活并导致宿主细胞病变。中国科学院微生物研究所刘翠华课题组长期致力于研究Mtb等重要病原菌与宿主相互作用的分子机制,近年来先后在NatureImmunology,TheJournalofImmunology等杂志发表系列研究工作,发现了Mtb通过分泌一系列效应蛋白调控宿主细胞功能进而逃逸宿主固有免疫清除的新机制,并揭示了病原菌与宿主间相互博弈的动态过程及分子机制,为抗结核药物研发提供了新思路和特异靶点。

  近年来,越来越多的研究表明病原微生物(包括多种病毒和细菌等)感染引起的慢性炎症可增加肿瘤发生发展的危险性,有关感染相关的慢性炎症诱发肿瘤的分子机制研究已成为当前生物医学领域的热点之一。然而,Mtb导致的慢性感染与肺癌的相关性至今尚无定论,关于Mtb效应蛋白在肿瘤发生发展中的分子调控机制更是知之甚少。刘翠华课题组之前的研究表明:Mtb效应蛋白PtpA(一种真核样酪氨酸磷酸酶)可被分泌至宿主细胞中结合泛素分子并被后者激活,进而去磷酸化宿主的p-JNK和p-p38并抑制JNK/p38信号通路的激活;同时PtpA还能以磷酸酶活性非依赖性的方式抑制NF-κB信号通路的激活(NatureImmunology,2015)。进一步的研究发现PtpA的宿主互作蛋白TRIM27(一种泛素连接酶)可作为宿主限制因子抑制分枝杆菌在巨噬细胞内的存活,而PtpA则可通过结合TRIM27蛋白的RING结构域而拮抗TRIM27介导的抗病原菌感染免疫功能(ScientificReports,2016)。最近,该课题组又发现PtpA不仅可在宿主细胞质中调控固有免疫信号通路,还可进入宿主细胞核内(图1)。ChIP-seq分析结果提示:PtpA在宿主细胞核内可调控一系列宿主基因的表达,这些基因主要涉及免疫调控(如TNFRSF8)以及细胞增殖和迁移(如GADD45A)等生物学功能。进一步研究发现PtpA可直接结合至GADD45A基因的启动子区并抑制该基因的转录,并进而促进人非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力及其在裸鼠中的成瘤能力,且该调控功能依赖于PtpA的DNA结合能力而不依赖于其磷酸酶活性。此外,受PtpA调控的宿主细胞核内的潜在靶基因中还包括某些与肿瘤发生发展密切相关的非编码RNA基因(如miR-488、CASC2和miR-622)(图2)。该研究发现了首个可进入宿主细胞核内调控宿主免疫及细胞增殖功能的Mtb效应蛋白PtpA,揭示了Mtb可通过其分泌的效应蛋白在特定情况下促进肺癌发生发展的分子机制。

  相关结果已在国际权威期刊NatureCommunications《自然通讯》在线发表,题为“ThemycobacterialphosphatasePtpAregulatestheexpressionofhostgenesandpromotescellproliferation”。刘翠华课题组的助理研究员汪静、研究生葛浦浦为该文章的共同第一作者,刘翠华研究员为该文的通讯作者。该研究得到了国家科技部、国家自然科学基金委、北京市自然科学基金委和中科院的资助。

  文章链接:http://www.nature.com/articles/s41467-017-00279-z.pdf

图1.MtbPtpA可进入宿主细胞核内

  图2.宿主细胞核内的MtbPtpA抑制固有免疫功能并促进肿瘤细胞增殖的机制示意图


使用CFSE追踪染料染色后,总的分裂次数除以进入细胞周期的细胞数。得到的数值就是增殖指数

1,CCK-8能否对活细胞进行染色?

不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐(WST-8),并通过电子载体PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的,因此CCK-8不能对细胞进行染色。

2,CCK-8检测溶液对细胞是否有毒?

CCK-8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是,加到培养基中的CCK-8是没有毒性的,因为被稀释了10倍。因此,长时间的培养,如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测,如结晶紫检测,中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同,因此在需要进行长时间培养时,先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。

3,在做加药实验时,药物对测定是否有影响?如何解决?

有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK-8,测定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基(加CCK-8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK-8之前更换培养基,去掉药物的影响。

4,每次测定的数值不一样,是什么原因?如何解决?

可能会有以下几个原因:1.当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。2.有可能会因为CCK-8沾在壁上而产生误差,建议在加入CCK-8后,轻轻敲击培养板以帮助混匀。3.每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。

5,如何设定空白对照?

在不含细胞的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时,还应考虑药物的吸收,可在不含细胞,加入药物的培养基中加入CCK-8,培养一定的时间,测定450nm的吸光度作为空白对照。

6,哪些物质会影响CCK8的测定?

当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定,例如含有维生素C的Glucose等(一般培养基中的量不多,酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下,会增加空白吸收,但不影响测定,扣除空白吸收即可。

7,在实验中吸光度值太高,如果不能减少细胞数量,如何解决?

可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

8,设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?

不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

9,说明书上仅写了96孔板的测定方法,如果使用24孔板或12孔板,应该加多少量CCK-8试剂?

一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

10,在CCK-8显色过程中,如何终止反应?

有一下几种方法(96孔板):①在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。②每孔加10μl0.1MHCL溶液。③每孔加10μl的1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24小时之内测定。

11,必须预培养细胞吗?

不一定。如果要向保持细胞的最好状态,建议预培养细胞。如果不做细胞预培养,细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养,但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

以上内容来自英格恩生物CCK8试剂盒

细胞集落形成实验
非整倍体无限细胞系和癌细胞株中,仍然存在不同细胞亚群,它们的功能和生长特点有些差异,其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力,细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞,细胞遗传性状、生物学特性相似,利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系,细胞集落率很低。细胞集落化培养之前,应先测定细胞集落形成率,以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。
目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力,集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验。
集落抑制率=(1-(实验组集落形成率/对照组集落形成率))×100%
(一)原理
细胞集落形成率 单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,称为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞,大小在0.3-1.0mm 之间。集落形成率表示细胞独立生存能力。常用方法有平板集落形成试验、软琼脂集落形成试验。
(二)实验用品
1.材料:Hela细胞。
2.器材:(直径 60mm )培养皿、细胞记数板、烧杯、吸管、离心机、离心管、废液瓶、倒置显微镜、二氧化碳培养箱、超净工作台、水浴锅。
3.试剂:Giemsa染液、0.25%胰蛋白酶消化液、血清细胞培养液、安尔碘、琼脂。
(三)方法
1.平板克隆形成试验
本法适用于贴壁生长的细胞,包括培养的正常细胞和肿瘤细胞。
(1)对指数生长期细胞,采用常规消化传代方法,制成细胞悬液。
(2)细胞悬液反复吹打,使细胞充分分散,单个细胞百分率应在95%以上。细胞记数,并用培养基调节细胞浓度,待用。
(3)根据细胞增殖能力,将细胞悬液倍比稀释。一般按照每皿含50、100、200个细胞的浓度分别接种5ml细胞悬液到培养皿(直径 60mm )中,以十字方向轻轻晃动培养皿,使细胞分散均匀。
(4)培养皿置 37℃ 、5%CO2中培养2~3周,中间根据培养液pH变化适时更换新鲜培养液。
(5)当培养皿中出现肉眼可见克隆时,终止培养,弃去培养液,PBS液小心浸洗2次,空气干燥。甲醇固定15分钟,弃甲醇后空气干燥。用Giemsa染液染色10分钟,流水缓慢洗去染液,空气干燥。
2.软琼脂集落形成试验
本法适用于非锚着依赖性生长的细胞,如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。利用琼脂液无粘着性又可凝固的特性,将肿瘤细胞混入琼脂液中,琼脂液凝固使肿瘤细胞置于一定位置,琼脂中肿瘤细胞可能向周围作全方位的移动,因此可以用来检测肿瘤细胞的主动移动能力。肿瘤细胞在适宜培养基中又可以增殖,从而可以测定肿瘤细胞克隆形成率。造血系统软琼脂集落形成试验方法相同,主要用于有关细胞分化的研究,但使用培养基不同。
(1)同上(1)~(3)步骤。
(2)调整细胞悬液密度为1×103个/ml细胞。
(3)制备底层琼脂,完全溶化的5%琼脂和 37℃ 左右预温的新鲜完全培养液以1:9比例在 40℃ 均匀混合,加入培养皿(直径 60mm )中,每皿含0.5%琼脂培养基2ml,室温下琼脂完全凝固。
(4)制备上层琼脂,取 37℃ 不同密度梯度(按照每皿含50、100、200个)的细胞悬液1.5ml移入小烧杯中,加入 40℃ 、5%琼脂等体积混匀,即成0.25%半固体琼脂培养基。配好的半固体琼脂培养基立即加入铺有底层琼脂的培养皿中,室温下琼脂凝固。 37℃ 、5%CO2静置培养2-3周。
(四)实验结果
1.定期观察细胞培养过程中集落的形成。
2.显微镜下计数大于50个细胞克隆数,然后按下式计算集落形成率:
集落形成率(%)=(集落数/接种细胞数)×100
(五)注意事项
1.琼脂对热和酸不稳定,如果反复加热,容易降解,产生毒性,同时琼脂硬度下降。故琼脂高压灭菌( 10磅 15分钟)后按一次用量进行分装。
2.细胞悬液中,细胞分散度>95%。
3.软琼脂培养时,注意琼脂与细胞混合时温度不要超过 40℃ ,以免烫伤细胞。
4.接种细胞密度不宜过高。
5.细胞在低密度条件下培养,生存率明显下降,无限细胞系和肿瘤细胞株克隆形成率一般在10%以上。但初代培养细胞和有限细胞系仅为0.5~5%,甚至为零。为提高集落形成率,必要时在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促细胞克隆形成物质。
细胞增殖,比如以有丝分裂的方式增殖,产生的是相同的细胞。
细胞分化,产生的是不同的细胞,例如造血干细胞可以分化出红细胞。


我做的课题与移植免疫耐受有关,目前在做的就是体外MLR。实验protocol如下:


供体小鼠(Balb/c)脾淋巴细胞经磁珠分选提取APC细胞,辐照灭活后作为刺激细胞。受体小鼠(C57)脾淋巴细胞经磁珠分选提取cd3细胞用CFSE标记作为反应细胞。调整供体细胞密度为5×10^6/ml,受体细胞密度为1×10^6/ml,分别按2:1,5:1,10:1的比例加入圆底96孔板,每组3个复孔,同时设单纯受体细胞和受体自身APC-cd3混合培养作为阴性对照组,37℃5%CO2共培养3天。共培养3天后收集细胞,3个复孔合并成一管,经PBS洗涤,加入CD3-PE流式抗体孵育标记T细胞,上流式细胞仪检测受体T细胞增殖程度。


结果:流式检测结果如下图所示,图3是各浓度梯度组间比较,想请教图中左侧是否为正常的增殖峰,因为此前多次结果均显示为宽大的单峰,未观察到所谓的细胞增殖峰,查阅之前的研究结果多数显示如未加细胞刺激物,单凭细胞的刺激作用形成的增殖相当微弱,极少呈现这样单个高尖的增殖峰。


图1

图2


图3(从上往下(黄、红、蓝)分别为5:1,2:1,10:1混合培养组)

单纯受体细胞的空白组没有增殖这个没有问题,但奇怪的是图4里作为阴性对照的反应组也是同样的双峰结果,尽管刺激效果不如前三组明显,但理论上用自身的APC刺激自身的cd3根本不会出现增殖,不知这样的结果是属于正常增殖还是假阳性结果,因为我们的阴性对照组细胞在镜下看被污染了,是否会受此影响表现为细胞增殖?

因本人刚接触免疫细胞实验不久,可能描述的问题比较小白,如有不当请大神们指正,非常感谢^^

图4(从下往下(黄、蓝、红)分别为空白组、5:1混合培养组和自身对照组)



ki67检测细胞增殖包含细胞分裂哪个期
Ki67,在很多肿瘤病理中做,它是判断肿瘤细胞增殖情况的一个指标,越高表示正在肿瘤细胞增殖多,恶性程度越高。P16,是一个抑癌基因,直接作用于细胞周期、抑制细胞分裂的基因,细胞内P16蛋白减少,会引起细胞周期调节紊乱,使细胞无限制增生,甚至癌变。
ki67是什么 Ki67是一种增殖细胞相关的核抗原,其功能与有丝分裂密切相关,在细胞增殖中是不可缺少 ,但其确切机制尚不清楚. Ki67标记的是处于增殖周期中的细胞。该标记阳性率越高,肿瘤生长越快,组织分化越差,对化疗也越敏感。一般来说,预后较差。
从细胞增殖角度看,细胞可分三类:
①持续分裂细胞,又称周期性细胞, 即在细胞周期中连续运转的细胞。机体内某些组织需要不断的更新,组成这些组织的细胞就必须通过不断分裂产生新细胞。此类细胞的分裂周期非常正常, 有丝分裂的活性很高。如性细胞(包括卵母细胞和精原细胞),它们要不断地产生配子; 造血干细胞需要不断地产生红细胞和白细胞;上皮基底层细胞需要通过分裂不断补充表面老化死亡的细胞; 植物的根茎尖端细胞需要通过分裂进行生长等都是具有正常周期的持续分裂细胞。
②终端分化细胞, 即永久性失去了分裂能力的细胞,它们不可逆地脱离了细胞周期, 但保持了生理活性机能。这些细胞都是高度特化的细胞, 如哺乳动物的红细胞、神经细胞、多形性白细胞、肌细胞等, 这些细胞一旦分化,就永远保持这种不分裂状态直到死亡。
③G0细胞,又称休眠细胞,暂时脱离细胞周期,不进行DNA复制和分裂, 也称静止细胞群。但这些细胞可在某些条件的诱导下重新开始DNA合成, 进行细胞分裂。如肝细胞, 外科手术切除部分肝组成后可以诱导进入细胞分裂。淋巴细胞可通过与抗原的相互作用诱导增殖。在胚胎发育早期(卵裂期),所有的细胞均为周期性细胞, 以后随着发育成熟, 某些细胞进入了GO期, 某些细胞分化后丧失分裂能力。到成体时,只有少数细胞处于增殖状态, 它们的增殖仅作为补充丢失的细胞, 或对外界刺激的反应。

做一个药物对细胞增殖和迁移的抑制的研究,已知药物对细胞增殖有影响,想要继续做迁移实验,怎么排除药物对细胞的抑制作用对细胞迁移产生的影响?谢谢大家!

细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物,以细胞分裂的方式产生新的细胞,用来补充体内衰老或死亡的细胞;同时,多细胞生物可以由一个受精卵,经过细胞的分裂和分化,最终发育成一个新的多细胞个体。必须强调指出,通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。可见,细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础
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