外周血单个核细胞样本的制备
| 实验方法原理 | 血液是天然的单个细胞分散的细胞悬液，血细胞在生理状态下呈分散的游离状态。它是流式细胞分析的理想样品。血液中的主要细胞成分为白细胞、红细胞和血小板；而其中白细胞主要成分又分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。但在血细胞中一般检测单个核细胞较为多见。 | ||||
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| 实验材料 | 外周血 试剂、试剂盒 | 肝素生理盐水 实验步骤 | 一、外周血细胞样本制备方法的选择 一般检测细胞大分子成分---DNA、RNA、蛋白质的含量、基因表达蛋白等，多采用淋巴细胞分离液分离法制备单个核细胞悬液。这样就可以从血液中分离出单个核细胞---淋巴细胞、单核细胞、幼稚血细胞和肿瘤细胞等。外周血免疫细胞、细胞生长因子、某些基因蛋白、细胞表面标志检测可来用溶红细胞法。 二、单个核细胞样品制备程序 1.取外周血2ml，肝素抗凝，用生理盐水将血稀释成4ml，混匀。 2.将稀释后血液沿试管壁徐徐加入4ml淋巴细胞分离液Ficoll到液面之上，勿用力过大，以免造成血液与分离液混合，保持清晰的分层状态。 3.离心2000r/min，30min，室温18~20℃，离心后可见试管内的血液清楚地分为4层，上层为血浆层，中层为分离液层（单个核细胞所处于血浆层和分离液层中间），底层为红细胞层，红细胞层上为粒细胞层。 4.用吸管将上层与中层之间的单个核细胞层吸出收集到另1试管中，用生理盐水洗2遍，每次均以1500r/min，离心10min，弃上清后即得到高纯度的单个核细胞悬液。 5.用适当的固定液固定或置低温冰箱保存待用。 |
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发布于 ： 2018-08-10
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