DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole),是一种能够与DNA强力结合的荧光染料,常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜,它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
中文名
DAPI
中文名:
4,6-联脒-2-苯基吲哚
分子式:
C16H15N5
分子量:
277.324
在荧光显微镜观察下,DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时,最大吸收波长为358nm,最大发射波长为461nm,其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合,但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果,其发散光的波长范围约在500nm左右。
DAPI的发散光为蓝色,且DAPI和绿色荧光蛋白(Greenfluorescentprotein,GFP)或TexasRed染剂(红色荧光染剂)的发散波长,仅有少部分重叠,研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。
DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合,因此DAPI对生物体而言,也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。
DAPI
中文名:4,6-联脒-2-苯基吲哚(?)
英文名:4',6-diamidino-2-phenylindole,2-(4-amidinophenyl)-1H-indole-6-carboxamidine,DAPIdihydrochloride
分子式:C16H15N5
结构式:
DAPI的结构
分子量:277.324
CASnumber:28718-90-3
光谱性质:DAPI的最大激发波长为340nm,最大发射波长为488nm
与双链DNA结合时最大吸收/最大发射为358nm/461nm;与RNA结合时,最大发射移动到500nm左右。
染色原理:
DAPI为一种荧光染料,可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光,和EB相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100%)。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟,在荧光显微镜下可以看到细胞核的形态变化。
a、正常的烟草细胞核:核形完整,染色质均匀。
b、染色质固缩,向外周聚集,形成周边化。
c、染色质进一步固缩,形成很多颗粒物质。
d、细胞核破裂形成碎片,核解体。
在细胞移植前,将DAPI以一定的浓度加入培养基中,与细胞共同孵育过夜,用PBS缓冲液漂洗至少6次以洗掉未结合的DAPI,再用酶消化后离心收集细胞,加入DMEM培养基制成细胞悬液以备用。
存储条件:-20℃避光保存
每次使用,用量较少,可反复冻融,无需分装
注意事项:
1、DAPI强烈致癌,操作时要戴上手套。
2、贮存液用70%酒精配制,浓度100μg/ml,可用黑纸包住,长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释,最终浓度100ng/ml。
3、DAPI是非常优秀的DNA染料,固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。
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