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免疫酶标技术
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免疫酶标技术

1)直接法

1.标本固定。

2.PBS洗涤2×3分钟。

3.1H2O2(或1H2O2甲醇)抑制内源性过氧化物,室温1020分钟。

4.正常血清110)孵育,室温20分钟。

5.滴加酶标记的抗体371小时或4℃过夜。

6.PBS洗涤3×3分钟。

7.DABH2O2显色510分钟,镜下控制染色结果。DABH2O2应用前15分钟配制。

8.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

2)间接法

1.标本固定。

2.PBS洗涤2×3分钟。

3.1H2O2(或1H2O2甲醇)抑制内源性过氧化物,室温1020分钟。

4.正常血清(110)孵育,室温20分钟。

5.滴加第一抗体,371小时或4℃过夜。

6.PBS洗涤3×3分钟。

7.滴加酶标二抗,室温1小时。

8.PBS洗涤3×3分钟。

9.0.04DAB0.03H2O2显色510分钟。

10.充分水洗后,复染、脱水、透明、封片、镜检。

3)PAP法(过氧化物酶抗过氧化物酶抗体复合物法)

1.标定固定后,PBS洗涤。

2.1H2O2(或1H2O2甲醇)阻断内源性过氧化物,室温1020分钟。

3.PBS洗涤2×3分钟。

4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20分钟。

5.滴加一抗,室温1小时或4℃过夜。

6.PBS洗涤3×3分钟。

7.滴加二抗,室温30分钟。

8.PBS洗涤3×3分钟。

9.PAP复合物,室温60分钟。

10.PBS洗涤3×3分钟。

11.0.04DAB0.03H2O2显色510分钟。

12.充分水洗。

13.苏木精复染,封片观察。

4)PAP

110同单PAP法。

11.二次加酶标二抗。

12.PBS洗。

13.二次加PAP

14.PBS洗。

15.0.04DAB0.03H2O2显色510分钟。

16.苏木精复染核,封片,镜检。

5)ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法)

18PAP

9)ABC液,室温60分钟。

10)PBS洗。

11)0.04DAB0.03H2O2显色510分钟。

12)充分水洗。

13)苏木精复染核,封片,镜检。

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