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StremChemicals/Graphene film, monolayer, on Si/SiO2 wafer (1cm x1cm), by CVD/1pc/06-0310-1pc
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StremChemicals/Graphene film, monolayer, on Si/SiO2 wafer (1cm x1cm), by CVD/1pc/06-0310-1pc
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strem
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2017-08-29
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TE缓冲液(pH 8.0)配制方法 123
风记社六团mfj2017-09-28
10 mmol/LTris-HCl(pH 8.0)
  1 mmol/LEDTA(pH 8.0)
  因为含有以上两种物质,所以称为TE。
  配制分三步:
  1)1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制:称取Tris碱6.06 g,加超纯水40 ml溶解,滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0,定容至50 ml。
  2)0.5 M EDTA(pH 8.0)50 ml的配制:称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g,加超纯水35 ml,剧烈搅拌,用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0,定容至50 ml。(EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时,才会溶解。)
  3)1×TE(10 mM Tris-HCl,pH 8.0;1 mM EDTA,pH 8.0)的配制:
  作用:
  TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 10mMTris-Hcl,pH有7.47.68.0三种。
  EDTA调到8.0是为了更好溶解,其他只要调到相应pH就可以。Tris在7-8附近缓冲能力很强,所以加8.0的EDTA下去后,不会改变pH。
缓冲液的时候颜色总是红色,没有变蓝,而且缓冲液加到孔里后总是往上跑,电级没有反。

做大麦蛋白的SDS-PAGE,样品一开始在孔里沉了,电流38,电压120,半个小时,样品进不了浓缩胶,时间长了,最后电泳缓冲液完全散掉了,用的是5%的Tris—Gly电泳液,5%SDS-PAGE浓缩胶,新手上路,求各位老师指点。


拨梳子的时候,浓缩胶是的孔都歪了

电泳


WB前,上样缓冲液是买的成品,在-20°冰箱保存,之前做一直正常,这次蛋白样品加上样缓冲液后变成棕色了?啥情况?是蛋白样品PH值的关系吗?这个还能继续跑电泳吗?

哪位高手给指导一下,谢谢!

缓冲液;能抵御少量的酸,碱或稀释少量倍数时,体系的pH基本不变的溶液称为缓冲溶液.缓冲溶液的缓冲对一般是由共轭酸碱对或两性物质组成.缓冲对在生物中是指酸碱性相反的东西,,可以相互中和,比如在人体中,乳酸和碳酸氢钠就是一对缓冲对
求采纳为满意回答。

求助一个小问题

灌注用的缓冲液里面加了EDTA和葡萄糖,这个可不可以115°灭菌呢,实验室没有大型滤器,只有小滤头,想方便一点配制。

谢谢支招,祝战友新年快乐!

我是一个新手,最近看文献的时候看到了“0.1MTris-EDTA缓冲液”,请问大家知道这表示什么意思,0.1M应该怎样理解呢?

由弱酸HA及其盐NaA所组成的缓冲溶液对酸的缓冲作用,是由于溶液中存在足够量的碱A-的缘故。当向这种溶液中加入一定量的强酸时,H+离子基本上被A-离子消耗,所以溶液的pH值几乎不变;当加入一定量强碱时,溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。
  在缓冲溶液中加入少量强酸或强碱,其溶液pH值变化不大,但若加入酸,碱的量多时,缓冲溶液就失去了它的缓冲作用。这说明它的缓冲能力是有一定限度的。
  缓冲溶液的缓冲能力与组成缓冲溶液的组分浓度有关。0.1mol·L-1HAc和0.1mol· L-1NaAc组成的缓冲溶液,比0.01mol·L-1HAc和0.01mol·L-1NaAc的缓冲溶液缓冲能力大。关于这一点通过计算便可证实。但缓冲溶液组分的浓度不能太大,否则,不能忽视离子间的作用。
  组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时,缓冲作用减小,缓冲能力降低,当c(盐)/c(酸)为1∶1时△pH最小,缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算:
  此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远,缓冲能力愈小,甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系,存在有效缓冲范围,这个范围大致在pKaφ(或pKbφ)两侧各一个pH单位之内。
  弱酸及其盐(弱酸及其共轭碱)体系pH=pKaφ±1
  弱碱及其盐(弱碱及其共轭酸)体系pOH=pKbφ±1
  例如HAc的pKaφ为4.76,所以用HAc和NaAc适宜于配制pH为3.76~5.76的缓冲溶液,在这个范围内有较大的缓冲作用。配制pH=4.76的缓冲溶液时缓冲能力最大,此时(c(HAc)/c(NaAc)=1。

  制备

  为了配制一定pH的缓冲溶液,首先选定一个弱酸,它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值,然后计算酸与碱的浓度比,根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。
  以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。
  缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用广泛,如鉴定Mg2+ 离子时,可用下面的反应:
  白色磷酸铵镁沉淀溶于酸,故反应需在碱性溶液中进行,但碱性太强,可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反应的pH值需控制在一定范围内,因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液,保持溶液的pH值条件下,进行上述反应。
  常用缓冲液配制
  枸橼酸-磷酸氢二钠
  甲液:取枸橼酸21g或无水枸橼酸19.2g,加水使溶解成1000ml,置冰箱内保存。
  乙液:取磷酸氢二钠71.63g,加水使溶解成1000ml。
  取上述甲液61.45ml与乙液38.55ml,混合,摇匀,即得。
  氨-氯化铵缓冲液
  取氯化铵1.07g,加水使溶解成100ml, 再加稀氨溶液(1→30)调节pH值至8.0,即得。
  氨-氯化铵缓冲液
  取氯化铵5.4g,加水20ml溶解后,加浓氨溶液35ml,再加水稀释至100ml,即得。
  醋酸-醋酸钠缓冲液
  取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60~80ml,至溶液从蓝色转变为纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得。
  醋酸-醋酸钠缓冲液
  取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。
  醋酸-醋酸钠缓冲液
  取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。
  醋酸-醋酸铵缓冲液
  取醋酸铵7.7g,加水50ml溶解后,加冰醋酸6ml与适量的水使成100ml,即得。
  醋酸-醋酸铵缓冲液
  取醋酸铵77g,加水约200ml使溶解,加冰醋酸57ml,再加水至1000ml,即得。
  醋酸-醋酸铵缓冲液
  取醋酸铵100g,加水300ml使溶解,加冰醋酸7ml,摇匀,即得。
  磷酸盐缓冲液
  取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml,即得。

  当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。弱酸及其盐的混合溶液(如HOAc与NaOAc),弱碱及其盐的混合溶液(如NH3·H2O与NH4Cl)等都是缓冲溶液。

  参考资料:http://baike.baidu.com/view/901429.htm

1、组成成分:

A、1×TE缓冲液:10mmol/LTris.Cl;1mmol/LEDTA,pH8.0。

B、1×TAE缓冲液:40mmol/LTris-乙酸;2mmol/LEDTA,pH8.0。

C、1×TBE缓冲液:45mmol/LTris-硼酸;1mmol/LEDTA,pH8.0。

2、用途:

A、TE缓冲液:一般用作溶解剂或保持剂,常用于溶解DNA,能稳定储存DNA。

B、TAE缓冲液:生物学中使用最广泛的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。

C、TBE缓冲液:生物学中常用的核酸电泳缓冲液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。

3、TAE和TBE缓冲液的选择:

TAE和TBE缓冲液都可以用于DNA的琼脂糖凝胶电泳,两者各有利弊,应根据实际情况选择不同的缓冲液。

4、注意:

TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物,出现沉淀后应予以废弃。


TBST中含有Tris-Hcl,NaCl,Tween20这三种物质,是做WESTERNBLOT中常用的一种缓冲液

TBST缓冲液的配制

1000ml×TBST的配置

先称量NaCl40g,倒入烧杯中,加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g,倒入刚才的那个烧杯中(PS:由于NaCl的量太多,一次称量不方便,所以分两次称量,且易于溶解)。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml,最后加(吐温20)5ml,转入1000ml容量瓶中,在定容,转移即可。

TBST缓冲液的应用:

1.主要用于免疫组化和原位杂交,酶联免疫等实验中,清洗免疫印。

2.迹膜;

注意事项:

1.TBST缓冲液,PH7.2-7.5;

2.颜色为无色透明液体;

3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴防护手套操作;


浓度为0.11mol/l及pH7.2的磷酸盐缓冲液怎么配制?
是sds-page实验用的