Make micropipettes to record cellular concentrations
- 0.1 mL
WPI’s Liquid Ion Exchangers (LIX), for use with the FD223A Electrometer, allow intracellular measurements to be made for cations (hydrogen, potassium and calcium).
Liquid Ion Exchanger Instruction Manual
ION | H+ | K+ | Ca++ |
CATALOG NO. | IE010 | IE190 | IE200 |
SELECTIVITY COEFFICIENTS* | |||
Na+ | 12.7 | 1.97 | 5.5 |
Mg++ | — | 2.95 | 4.9 |
K+ | — | — | 5.4 |
Ca++ | — | 2.7 | — |
USEFUL pH RANGE | 2-10 | 4-10 | 4-10 |
SLOPE | 56 mV | 58 mV | 28 mV |
LINEAR RANGE | pH 4-12 | pK 0-3 | pCa 1-7 |
APPROX. EQUIV. | — | Corning477317 | ETH1001 |
*Selectivity Coefficients are expressed here as -log Kij or pKij. |
Yoshida, T., Nin, F., Ogata, G., Uetsuka, S., Kitahara, T., Inohara, H., … Hibino, H. (2015). NKCCs in the fibrocytes of the spiral ligament are silent on the unidirectional K+ transport that controls the electrochemical properties in the mammalian cochlea. Pflügers Archiv - European Journal of Physiology, 467(7), 1577–1589. https://doi.org/10.1007/s00424-014-1597-9
Kuwana, S., Okada, Y., & Natsui, T. (1998). Effects of extracellular calcium and magnesium on central respiratory control in the brainstem-spinal cord of neonatal rat. Brain Research, 786(1–2), 194–204. Retrieved from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9555011
Welsh, D. G., Jackson, W. F., & Segal, S. S. (1998). Oxygen induces electromechanical coupling in arteriolar smooth muscle cells: a role for L-type Ca 2+ channels. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology, 274(6), H2018–H2024. https://doi.org/10.1152/ajpheart.1998.274.6.H2018
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移液器又称移液枪,是一种用于定量转移液体的器具,被广泛用于生物、化学等领域。
1)按到第一档,垂直进入液面几毫米。
2)缓慢松开控制按钮,否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸入移液器内部吸入体积减少。
3)打出液体时贴壁并有一定角度,先按到第一档,稍微停顿1s后,待剩余液体聚集后,再按到第二档将剩余液体全部压出。
二、黏稠或易挥发液体的移取
在移取黏稠或易挥发的液体时,很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性,建议采取以下方法:
1)移液前先用液体预湿吸头内部,即反复吸打液体几次使吸头预湿,吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体(如1000~1),建议将吸头预湿后再移取。
2)采用反相移液法:吸液时按到第二档,慢慢松开控制按钮,打液时按到第一档即可,部分液体残留在吸头内。
三、常见的错误操作
1)吸液时,移液器本身倾斜,导致移液不准确(应该垂直吸液,慢吸慢放)。
2)装配吸头时,用力过猛,导致吸头难以脱卸(无需用力过猛,选择与移液器匹配的吸头)。
3)平放带有残余液体吸头的移液器(应将移液器挂在移液器架上)。
4)用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。
5)直接按到第二档吸液(应该按照上述标准方法操作)。
6)使用丙酮或强腐蚀性的液体清洗移液器(应该参照正确清洗方法操作)。向左转|向右转
从大量程调节至小量程为正常调节方法,逆时针旋转刻度即可。从小量程调节至大量程时,应先调至超过设定体积刻度,再回调至设定体积,这样可以保证移液器的精确度
2.装配移液枪头
将移液枪垂直插入吸头,左右旋转半圈,上紧即可。用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的,长期这样操作回导致移液器的零件因撞击而松散,严重会导致调节刻度的旋钮卡住
3.吸液及放液,垂直吸液吸头尖端浸入液面3mm以下,吸液前枪头先在液体中预润洗慢吸慢放放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁
4.吸有液体的移液枪不应平放,枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈
5.移液枪在每次实验后应将刻度调至最大,让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命
6.吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指,绝不允许突然松开,以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。
7.为获得较高的精度,吸头需预先吸取一次样品溶液,然后再正式移液,因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时,吸头内壁会残留一层”液膜”,造成排液量偏小而产生误差。
8.浓度和粘度大的液体,会产生误差,为消除其误差的补偿量,可由试验确定,补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。
9.可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法,来校正取液器,1mL 蒸馏水20℃时重0.9982g. 所设量程在移液器量程范围内不要将按钮旋出量程,否则会卡住机械装置,损坏了移液器。
10在设置量程时,请注意:数字清清楚楚在显示窗中, 旋转到所需量程
11.移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体(如浓酸、浓碱、有机物等)。
12.严禁使用移液器吹打混匀液体。
13.不要用大量程的移液器移取小体积的液体,以免影响准确度。同时,如果需要移取量程范围以外较大量的液体,请使用移液管进行操作。
一般来说,为防止所吸取体积上出现误差,有一些基本的操作原则必须遵守。对吸取体积误差影响的因素主要有三个方面:①流体静压;②吸头润湿;③流体动力学。当样本体积从毫升范围降低至微升范围时,物理作用力的关系即发生变化,对于加样来说,其意味着液体表面的作用力效应与其体积或质量(例如重力)的作用力效应相比有所增加,因此,加样器生产厂家在设计和构建加样器和吸头中必须仔细考虑这种情况,而且在使用时也必须注意。
流体静压:在吸取液体时,加样器吸头只能浸入液体几毫升以确保与排出液体时相同的流体静压条件,因此,加样器必须以几乎垂直的方式加取液体,因为倾斜的方式将减少液体柱的高度,导致吸取的液体过多。如果加样器在30℃下以垂直方式吸取液体,可吸取至0.15%更多的液体。
吸头润湿:当吸头排空时,仍会有一些残留的液体以薄膜6f形式保留在吸头的侧面,其量取决于液体和吸头表面的相互作用,因此,其是一个常数,但依液体材料的不同而不同。对于水溶液,这种润湿影响在构建加样器时就应考虑。对于蛋白溶液等黏度高的液体,建议在加样前吸打液体数次,以保证加样的一致性。
流体动力学:对体积吸取的第三个影响是从加样器吸头外壁液体的释放,在此过程中,吸头的几何形状起一个关键的作用。为确保加样中的稳定条件,加样器吸头应靠在管壁上,于是,液体可顺着管壁流出,而不出现液滴,液滴的形成可由于其表面张力的作用而阻止液体从吸头中释放。如果吸头安装不正确或使用不相配的吸头,相对加样误差将达到0.4%以上。
1,大家用什么品牌的?
2,计划购买100ul-1000ul移取量的移液器,目前联系了两家,一家是“瑞宁”,据说是梅特勒旗下公司,只生产移液器,比较专业;另一家是“普兰德”,据说是默克旗下产品,价格都差不多,有对该品牌了解的战友不妨谈谈注意事项?
谢谢!
移液器使用过程中的注意事项如下:
一.设定移液体积:1.从大体积调节到小体积时,为正常调节方法,逆时针旋转刻度即可;2.从小体积调节至大体积时,可先顺时针调至超过设定体积的刻度,再回调至设定体积,这样可以保证最佳的精确度。
二.装配移液器吸头:1.单道移液器,将移液端垂直插入吸头,左右微微转动,上紧即可2.用移液器反复撞击吸头来上紧的方法是不可取的,这样操作会导致移液器部件因强烈撞击而松散,严重的情况会导致调节刻度的旋钮卡住。3.多道移液器,将移液器的第一道对准第一个吸头,倾斜插入,前后稍许摇动上紧,吸头插入后略超过O型环即可。
三.养护:1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物;2、移液器使用完毕后,把移液器量程调至最大值,且将移液器垂直放置在移液器架上;3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用60%的异丙醇消毒,再用双蒸水清洗并晾干;4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准;5、发现问题及时找专业人员处理;6、当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平或倒置放置,以防液体流入活塞室腐蚀移液器活塞;7、正确使用移液器吸液、排液,以达高精准度;8、平时检查是否漏液的方法:吸液后在液体中停1-3秒观察吸头内液面是否下降;如果液面下降首先检查吸头是否有问题,如有问题更换吸头,更换吸头后液面仍下降说明活塞组件有问题,应找专业维修人员修理。9、需要高温消毒的移液器应首先查阅所使用的移液器是否适合高温消毒后再行处理。
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