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凝胶选择指导
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Invitrogen提供了大量的涵盖面广的蛋白分离预制胶,包括不同的成分,百分比浓度和格式。使用合适的胶百分比浓度,缓冲系统,上样孔格式以及胶的厚度,对于获得最好的结果非常重要。以下提供了帮助你选择适合你应用的正确凝胶的信息。
E-PAGE™ 96 High-Throughput System是整合的、无缓冲液系统,设计用来检测和分析大量的蛋白样品,时间仅仅需要14分钟。
NuPAGE® Novex Gels组合了完美的技术和极度的可靠性。货架期长达12个月,比其它蛋白凝胶需要的电泳时间更短,中性pH值,为大多数蛋白的分离和转移提供优良的性能。现在可以获得8个分离范围,分离绝大多数不同大小的蛋白。
Novex® Tris-Glycine Gels基于传统的Laemmli buffer system,可能被使用在所有鞍椎姆掷搿Mü齀nvitrogen公司可以获得12种不同百分比浓度和加样孔大小的凝胶。
Novex® Tricine Gels是分离肽和低分子量蛋白的理想凝胶。
Novex® Zymogram Gels使用gelatin或者casein作为底物分离活性蛋白酶,可以鉴定蛋白酶的大小和活性。
预制聚丙烯酰胺凝胶一般信息:
基质: 聚丙烯酰胺厚度: 1.0mm或者1.5mm 大小: 8cm(h)x8cm(w)cassette 大小: 10cm(h)x 10cm(w)加样孔格式:17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/准备 孔或者IPG孔堆积胶:大多数Novex® gels为4%堆积胶
* Novex®预制胶适用于XCell SureLock™ Mini-cell和大部分其它设计为10cm(h)×10cm(w)gel cassette的mini-cells。E-PAGETM预制胶适用于E-Gel® Base,E-Gel® PowerBaseTMv.4或者E-Base™单元。
选择合适的凝胶百分比浓度
一般而言,分离分子的大小应该决定你选择丙烯酰胺的浓度。使用低百分比浓度凝胶分离较大的分子,高百分比浓度的凝胶分离较小的分子。进行等电聚焦时,这条规则例外。参看凝胶迁移图发现最适合你应用的凝胶。通常,为了达到最佳的分辨率,分子应该移动通过凝胶长度的70%。当蛋白分子量范围宽或者未知,梯度胶通常是最好的选择。
选择加样孔格式和凝胶厚度
我们提供大部分聚丙烯酰胺凝胶为9孔的格式(17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/准备 孔或者IPG孔)。一些类型的凝胶可以得到两种厚度(1.0mm和1.5mm)。如果上样量大(>30μl)时,使用较厚的凝胶(1.5mm)和较少的上样孔(5孔)更为合适。如果blotting,记住蛋白从1.0mm的凝胶中比从1.5mm的厚胶中更容易转移。表1总结了各种类型凝胶的特定和应用。使用表2确定哪一种上样孔格式最适合容纳你的样品量。
表1 选择使用胶的类型
胶的类型胶浓度分离范围货架期平均电泳时间应 用
蛋白质分析E-PAGE™ 966%10-200 kDa1年14分钟高通量、变性蛋白的分离,以进行重组生产分析和蛋白谱研究,可以电泳后染色和western blots
NuPAGE® Bis-tris10%,12%,4-12%1.5-300 kDa1年35-50分钟pH中性,12个月货架期凝胶。对于变性和还原蛋白具有优良的分辨率。是分析小到中等大小蛋白的最佳选择。
NuPAGE® Bis-Acetate7%,3-8%30-400 kDa8个月60分钟8个月货架期的高性能凝胶。对于较大的蛋白效果极佳。也能够用来做非变性电泳(native)。
Tris-Glycine4%,6%,8%,10%,12%,4-20%,4-12%,14%,16%,18%,8-16%,10-20%6-500 kDa1-2月90分钟准确和可重复的分离非变性(native)和变性蛋白。可以得到各种范围的Laemmli-style 凝胶。
Tricine10%,16%,10-20%2-200 kDa1-2月90分钟小肽的分离
IEFpH3-7,pH3-10pI3.0-pI8.55月150分钟根据等电点分离可溶性蛋白。
Zymogram10%(gelatin),12%(casein),4-16%(casein)30-200 kDa2个月90分钟利用casein 和gelatin作为底物,确定特别活性蛋白酶。
表2 获得最佳结果的推荐上样量
聚丙烯酰胺凝胶1孔IPG孔2D孔 5孔9孔10孔12孔15孔17孔
最大上样量/孔1.0 mm厚度700 µl7 cm IPG条400 µl60 µl28 µl25 µl20 µl15 µl15 µl
1.5 mm厚度n/a n/a600 µln/an/a37 µln/a25 µln/a
推荐获得最佳分辨率的最大上样量*每条蛋白带,考马斯亮兰染色12 µgn/a12 µg2 µg0.5 µg0.5 µg0.5 µg0.5 µg0.5 µg
注释:E-Gel® 要求20μl样品量/孔 。*NuPAGE®胶比Tris-Glycine 或Tricine有更高的蛋白上样能力。

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