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透析离心后的蛋白超滤浓缩之后蛋白沉淀怎么解决
2017-04-20
问题描述:

如题,透析之后离心得到了澄清的蛋白溶液,为什么浓缩超滤之后蛋白出现我蛋白颜色的沉淀,是因为蛋白浓度太浓了还是缓冲液等其他问题(本人养的蛋白pi值大于9,用的ph7.0的20mM磷酸盐缓冲液)

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Ksoul
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浓缩后蛋白浓度过大容易发生聚集,先适量降低浓缩倍数看看。
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海风朔语
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Ksoul浓缩后蛋白浓度过大容易发生聚集,先适量降低浓缩倍数看看。我是打算上纯化仪,打算超滤到10ml左右,浓度也不是特别大,但是就是会沉淀,不知道有啥办法
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Ksoul
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海风朔语我是打算上纯化仪,打算超滤到10ml左右,浓度也不是特别大,但是就是会沉淀,不知道有啥办法看你过什么柱子,分子筛还是离子交换什么的,我这边经常用分子筛,理论2~20mg/ml,建议浓度5~15mg/ml。离子交换也用,这个载量要求比较宽泛灵活。如果聚集沉降太明显,一是降低蛋白浓度,二是可以在不影响蛋白性质的情况下提高助溶剂的浓度。
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海风朔语
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Ksoul看你过什么柱子,分子筛还是离子交换什么的,我这边经常用分子筛,理论2~20mg/ml,建议浓度5~15mg/ml。离子交换也用,这个载量要求比较宽泛灵活。如果聚集沉降太明显,一是降低蛋白浓度,二是可以在不影响蛋白性质的情况下提高助溶剂的浓度。打算过离子柱,如果说把20mM磷酸盐缓冲液适当提高浓度可以减少蛋白聚集沉淀是吧
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