Northern杂交
实验方法原理 | 转移并固定到膜上的RNA样品可以与特异的探针杂交,从而用来对所感兴趣的RNA进行定位。视实验人员和条件的差异,可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后,在适于探针和固定的靶RNA杂交的条件下将膜同探针孵育,而后广泛洗膜以去除非特异结合的探针,最终在膜上产生一个紧密结合探针的影像分布。分析了杂交结果之后,探针可以从膜上洗去,膜可重复使用于下一个实验。 | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
实验材料 | DNA或RNA探针 试剂、试剂盒 | 预杂交液SSC 仪器、耗材 | 滤纸沸水浴水浴 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 预杂交液(0.5mol/LpH7.2),7%(m/V)SDS,1mmol/LEDTA(pH7.0)) SSC(0.5X,1X,和2X)含0.1%(m/V)SDS SSC(0.1X和0.5X)含0.1%(m/V)SDS 2.核酸和寡核苷酸 DNA或RNA探针(>2X108cpm/μg) 固定于膜上的RNA 3.专用设备 滤纸(Whamian3MM或相当效果的滤纸) 沸水浴 预热到68℃的水浴 预设到杂交温度的水浴 二、方法 1.在10~20ml预杂交液中68℃温育膜2h。 2.若使用双链探针,在100℃下加热32P标记的双链DNA5min,使之变性,然后迅速移至冰水中冷却。 3.把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中,在合适的温度下继续温育12~16h。 4.杂交后,将膜从塑料袋中取出,在室温下迅速转移到含有100~200ml1XSSC,0.1%SDS的塑料盒内,将盒盖好,置于水平振荡器上,温和振荡10min。 5.将膜转移至另一含有100~200ml预热至68℃、含0.1%SDS的0.5XSSC的塑料盒中。68℃下温和振荡10min。 6.重复步骤5,再洗涤至少2次,使68℃下共洗涤3次。 7.在印迹纸上晾干膜,然后让膜于-70℃下在含增感屏的暗盒内对X线片(KodakXAR-5或相应的胶片)放射自显影24~48h。此外,也可通过磷图像系统扫描得到膜上的图像。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。
发布于 : 2018-08-08
阅读(336)
▍
相关分类
▍
相关文章
免费待测小鼠胰岛素样生长因子2(IGF2)ELISA试剂盒kit说明书_价格...
mrna逆转录成cdna原理(1)
shengyao923的微博_微博
Cell counting KIT8 (CCK8)日本原装_细胞增殖与毒性_细胞检测...
CN103343274A 高导热金刚石颗粒混杂增强石墨铝复合材料 ...
hypermol|产品资讯|
GUANGZHOU HANPU PHARMACEUTICAL CO.,LTD GUANGZHOU HANPU...
IFNalphasignalingpathway资讯
环介导等温扩增技术在临床上的应用《中华医学会第七次全国中...
轻薄小巧的随身卫士、智能安全的贴心保镖——360儿童手表SE5体验_搜 ...
重组杆状病毒的纯化实验 实验方法
Creative BioMart 授权签约代理|产品详情|科技 ...
▍
相关问答