Name | 101Bio HRP Substrate Kit | |||||||||
Cat. # | P5W1 How to pay with Also can buy from : | |||||||||
Application | Western Blot Ready to use, strong and long-lasting signal (>4h), low background. This product is for research use only. | |||||||||
Product Size | 30 ml / 30 ml | |||||||||
Description | 101Bio HRP substrate kit provides high intensity signal and low background detection of low abundance endogenous proteins. This highly sensitive ECL substrate is available in a two-bottle format for Western blotting with horseradish peroxidase (HRP) enzyme conjugates.This high-performance substrate will pick up your most difficult-to-detect proteins in Western Blots.The ECL substrate is compatible with different membranes, blocking reagents and a wide range of antibody dilutions. 101Bio HPR substrate kit provides excellent performance, versatility and long-lasting signal for high quality data.
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Shipping / Storage | Ship at room temperature.Store at 4℃ | |||||||||
Shelf Life | 12 months | |||||||||
Manual (protocol) | 101Bio.com HRP Substrate Kit | |||||||||
Components |
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Name | Cat. # | Size | ||
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101Bio HRP Substrate Kit | P5W1 | 30 ml /30 ml | ||
101Bio Antibody Enhancer | P5W2 | 30 ml | ||
101Bio WB Stripping Solution | P5W3 | 250 ml | ||
101Bio Ponceau S Stain | P5W4 | 250 ml | ||
101Bio Peroxidase Suppressor | P5W5 | 30 ml | ||
101Bio High Efficiency Protein Precipitation kit | P5W6 | 30 ml /30 ml | ||
101Bio Red Blood Cell Lysis Buffer | P5W7 | 250 ml | ||
101Bio WB Blocking Solution | P5W8 | 250 ml | ||
101Bio Denaturing Protein Solubilization Reagent | P5W9 | 10 ml | ||
101Bio Non-Denatured Protein Solubilization Reagent | P5W10 | 10 ml | ||
101Bio Protein Solubilization Reagent for MS | P5W11 | 2 ml | ||
101Bio SDS-Remover | P5W12 | 10 ml | ||
101Bio Albumin Depletion Reagent for Plasma and Serum | P5W13 | 10 ml | ||
101Bio Protein A+G Agarose Beads | W0349 | 1 ml | ||
101Bio Protease Inhibitor Cocktail (100x) | W2200 | 1 ml | ||
101Bio Yeast Total Protein Extraction Kit for SDS-PAGE | Y203-50 | 50 rxn |
Exosome Isolation | Purity > 95% | |
Protein Extraction | 1 min total protein, 40 min membrane protein | |
3D Cell Culture Gel | 30% < mkt=""> | |
PCR Kits | 50% < mkt=""> | |
Beta-Hexosaminidase Activity Colorimetric Assay | Fast and sensitive, High-throughput | |
Endotoxin-Free Plasmid Kits | maxi, midi and mini-prep |
ebiomall.com
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可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基础上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外,还需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样,上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶,它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物,并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下,在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′,5′-磷酸二酯键,其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105,由5条多肽链组成,分别命名为α,α,β,β′,和γ,全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105,由10~12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外,在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。
一、内切酶作用体系:(自建立,试过,效果很好)
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程:(翻译稿)
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA(避免目的基因被切割),或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液,通过26gaugeneedle5次,37℃孵育30min(降低DNA大小,利于充分变性)
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中,搅拌混匀,短暂离心。
3.37℃孵育15min。(有的资料介绍说可以42度20min)
4.90℃孵育2min(95度5nin也可),置于冰上,短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0(BDH)。(加7.6gNa2S2O5到15ml水,加464ul新鲜配制的10MNaOH)
6.加12ul10mM氢醌(55mg加水50ml氢醌),混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油,防止水分蒸发,限制氧化。
8.55℃孵育4-16h(水浴)。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连,(注意连接紧)用吸管吸到注射器,底加2ml的离心管;轻轻加压,不要弄破膜;②加2ml80%的异丙醇洗涤,离心10000rpm,30s,底换管;柱子换到新1.5ml尖EP管,弃注射器;③加50ul预热水(60-70℃)放2-3min;离心(柱子与离心管一起,10000rpm,30s,DNA到EP管,弃柱子;
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液,弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原(10mg/ml)
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷(-20℃)100%乙醇,充分混匀
18.-20℃过夜(或者-70℃30min)
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清,加70%乙醇洗涤,4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中,室温下静置~2h,间隔旋涡振荡
22.-20℃保存DNA
hotstar酶做PCR,或者做Q-PCR
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
目前我准备做甲基化PCR,由于经费问题,可能无法购买高价的试剂盒。看过甲基化PCR的原理后,在考虑经过修饰后,是否可以用RT-PCR的试剂盒(有现成的)来做甲基化PCR。请大牛指导!另求各位推荐性价比高的亚硫酸盐修饰试剂盒,谢谢!
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