Optimized,completesystemforproductionoffull-lengthCDNAfromlowamountsoftotalRNA.
- Synthesizefull-lengthcDNA(>15kb)
- Generatefirst-strandcDNAfrompicogramamountsoftotalRNA
- Selectolido(dT)orrandomprimers-bothincluded
Applications
- First-strandcDNAsynthesisforsubsequentPCRorreal-timePCR.
- RT-PCRvalidationofgeneexpressiondataobtainedfrommicroarrayexperiments.
- RT-PCRvalidationandquantificationofgenesilencingbyRNAinterference.
TheMMLVReverseTranscriptase1st-StrandcDNASynthesisKitproducesfull-lengthfirst-strandcDNAfromtotalcellularRNApreparationsorpurifiedpoly(A)RNA.
ThiscompletekitincludesthesameMMLVHighPerformanceReverseTransciptasethatisavailableasaseparatecomponent(Cat.No.RT80125K)andmaintainsallthesamehighperformancecharacteristicsasthatstandaloneenzyme.TohelpsimplifyyourcDNAsynthesis,thiskitcontainsallthenecessarycomponentstomake1ststrandcDNA.
Benefits
- Synthesizefull-lengthcDNAfromRNAtemplateslongerthan15kb.
- MMLVHPRTdemonstratessignificantlyhigheractivitythancompetitivereversetranscriptaseenzymes.
- ReactionBuffer,optimizedforproducingfull-lengthcDNA,isincludedwithboththeMMLVHPRTandtheMMLVReverseTranscriptase1st-StrandcDNASynthesisKit.
- Thekitincludesbothanoligo(dT)andrandomnonamerprimers.
- First-strandcDNAcanbemadefrompicogramamountsofinputtotalRNA.
- ThekitincludesapotentRNaseInhibitortoprotecttheintegrityoftemplateRNA.
Figure1.MMLVHPRTproducesfull-lengthcDNAfrommRNAlongerthan15kb.TotalRNAisolatedfromHeLacellswasreversetranscribedandthecDNAwasamplifiedbyPCR.Detectionofthe1.3-kbPCRampliconfromnearthe5´endofthemRNAdemonstratesfull-lengthreversetranscriptionofHERC1mRNA(A).AgarosegelanalysisofthePCRproductsshowsthe1.3-kbampliconfromthe5´endofthemRNA(B).LaneM,100bpDNAladder;lane1,no-RTcontrolreaction;lane2,PCRproductfromcDNAsynthesizedbyEpicentre'sMMLVHPRT.
TargetTranscript(Size) | 3´/5´Ratios | ||
EpicentreMMLVHighPerformanceReverseTranscriptase | CompetitorI(RNaseH-MutantofMMLVRT) | CompetitorP(MMLVRT) | |
ACTB(1,792b) | 0.9 | 1.7 | 1.2 |
GUSB(2,162b) | 1.0 | 6.1 | 2.5 |
TFRC(5,010b) | 5.5 | 12.1 | 11.3 |
Table1.3´/5´ratioanalysisofcDNAproducedbydifferentreversetranscriptaseenzymes.TotalcellularRNAfromHeLacellswasconvertedtocDNAusingthethreereversetranscriptaseenzymesindicatedinthetable.A3´/5´ratioequalto1.0meansthatequalamountsofPCRproductsareobtainedfromboththe3´and5´endofthecDNAandthereforeisagoodindicationthatthereversetranscriptasehasproducedafull-lengthcDNAcopyofthemRNA.
2A.
Figure2.cDNAproducedbyEpicentre'sMMLVHighPerformanceReverseTranscriptaseyieldsasignificantlyimproved3´/5´ratiothancompetitivereversetranscriptases.Theapproximately2160-baseHeLaβ-glucuronidasemRNA(GUSB)wasreversetranscribedintocDNAusingEpicentre'sMMLVHighPerfomanceReverseTranscriptaseandtwocompetitivereversetranscriptaseenzymes.PCRprimerpairstothe3´-endand5´-endofGUSBcDNAweresynthesizedandqPCR(SYBR®GreenIdyedetection)wasperformedusingeachprimerpairandtheGUSBcDNAsastemplates.The3´/5´ratiowascalculatedforeachasdescribedinthetext.(A).PCRampliconsfromthe3´endand5´endoftheGUSBcDNA.(B).qPCRquantificationgraphsfordetectingthe3´ampliconand5´ampliconofGUSBcDNAproducedbyEpicentre'sMMLVHighPerformanceReverseTranscriptaseKitandtwoothercommerciallyavailablereversetranscriptaseenzymes.
5'-amplicon | |
3'-amplicon |
2B.
EpicentreMMLV1st-StrandcDNASynthesisKit
CompanyIRNaseH-minusMMLVRT
CompanyPMMLVRT
ORDERINFORMATION
MMLVReverseTranscriptase,10XReactionBuffer,RiboGuard™RNaseInhibitor,dNTPPreMix,DTT,Oligo(dT)21Primer,Random9-merPrimers,RNase-freeWater.ebiomall.com
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CDNASizeFractionation做完后的电泳检测,发现条带的大小都在5000bp左右,感觉是哪里有问题。前面步骤检测很好。不知道有问题没有?请哪位高人指点一下。
将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。
以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
二、 DNA文库和cDNA文库的构建原理
DNA文库:用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA,可以得到大量的基因组DNA片段,然后将这些DNA片段与载体连接,再转化到细菌中去,让宿主菌长成克隆。这样,一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段,整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。
cDNA文库:以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
三、DNA文库和cDNA文库的用途
基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同。DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA展开
1、属性自定义
作为筛选的内容,完全自定义的属性,满足您快速查询的特殊要求,新建栏目、新增分类,通过设置属性的使用状况和显示顺序,编辑符合您企业需求的最佳属性配置。
2、多标签自定义
在进行客户分类管理时,可添加多个自定义标签,分门别类后根据客户重要性选择标签颜色。方便您的产品经理进行一对一需求分析和功能规划,针对不同类型客户进行差异化服务。
3、庞大的数据分析
回头客提供销售统计、订单统计、产品统计和员工绩效统计的四大图表,分别从销售全局、客户消费情况、产品销售情况、员工绩效四大维度全方位展示销售深度数据。
4、详细的联系记录
详细记录每一次与客户的互动,并可自行制定联系计划,查询时可按下一次计划联系时间或最近一次联系时间自选排序,保证与客户保持周期性的联系。
5、岗位层级显示
默认通过岗位层级展示相应数据,如部门主管可查看部门全部联系记录、组长可查看小组全部联系记录,层级管理,简单便捷。
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已经在mirbase数据库下载水稻的所有miRNA序列,可以比对某种昆虫的转录组文库寻找靶基因吗?
可以用targetscan或者miRwalk网站吗?有什么方法吗?
基因表达谱指通过构建处于某一特定状态下的细胞或组织的非偏性cDNA文库,大规模cDNA测序,收集cDNA序列片段、定性、定量分析其mRNA群体组成,从而描绘该特定细胞或组织在特定状态下的基因表达种类和丰度信息,这样编制成的数据表就称为基因表达谱。
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