[器材和试剂] ●PCR试剂和设备 ●cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1） ●Gelleclean试剂盒（Qbiogene） ●WtzardPCR纯化试剂盒（ProlneSa） ●RJHl/2Xho引物：5"-GGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGGTGGA-3" ●RJH3Xho引物：5"-GGGACAATGGTCACCGTCTCGAGTGGTGGA-3" ●RJH4/5Xho引物：5"-GGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGTGGTGGA-3" ●RJH6Xho引物：5"-GGGACCACGGTCACCGTCTCGAGTGGTGGA-3" ●FdSEQl引物 ●pHENl-Vλ3载体DNA（可以根据MTA） [方法] 1.配制4个独立的50ulPCR反应混合液，包含： ●水，35.5ul ●20XdNTP（每种5mmol/L），2.5ul ●FdSEQl引物（10pmol/u1），2.5ul ●反向引物（10pmol/u1），2.5ul ●单链scFv模板DNA（10ng），1.0ul ●VentDNA聚合酶（2单位），1.0ul 2.在有加热盖的热循环仪内加热反应混合液到94℃5分钟。 3.以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分钟的条件共循环25次，扩增VL基因。 4.用WizardPCR纯化试剂盒纯化PCR产物。 5.用XhoI和NotI消化PCR产物；但除了用XhoI替代NcoI,还需用NEB2缓冲液和BSA,按照厂家要求进行。 6.用XhoI和NotI消化pHENl-VL3载体DNA;但不要用XhoI替代NcoI. 7.连接已消化的PCR产物和已消化的载体，并电转化到大肠杆菌TGl细胞中，构建4个VL基因噬菌体文库。测定文库容量并将细菌性文库材料储存于-70℃。 8.用含甘油文库储存材料细菌接种到含100ug/ml氨苄青霉素和1%葡萄糖的100ml2XTY培养基中，制备每种VL基因文库DNA.接种量应足够大以保证接种细菌数至少比文库容量大5倍。过夜培养后，按标准的DNA质粒制备方法进行操作。为了续后进行文库消化，可合并不同文库的DNA.
