基于杆状病毒的 展示和基因传递系统一杆 状 病 毒 介 导 的 基 因 递 送 效 率 的 监 测
| 实验步骤 | 杆状病毒介导的基因递送效率的监测材料试剂 D-荧光素：0.6mmol/L荧光素溶于〇.6mol/L柠檬酸钠缓冲液中（pH5.0) 分装，每管2ml,-20℃保存。在使用时，以：：5用水稀释。一旦解冻，溶液在4℃可以保存几天。 哺乳动物细胞（如人肝细胞系HepG2) 仪器 细胞培养皿 荧光计数仪 不透明96孔板（白色或黑色) 方法 1•在60mm培养皿中种人IXlO6个细胞，37°C,5%CO2孵育18〜24h。 用于突光素监测的初始细胞数取决于实验所用的细胞系、重组杆状病毒以及荧光计数仪的检测灵敏度。 2•将病毒以IOOpfu/个细胞的量稀释到Iml无血清培养基中。 没有纯化过的或是经蔗糖梯度纯化的病毒也可以用于试验。注意，用传统的蚀斑形成法测定的病毒滴度只能说明在昆虫细胞中杆状病毒的感染率，所以，病毒滴度并不代表其在哺乳动物细胞中的感染率。因此，我们推荐运用李时定量PCR来获得准确的病毒数（Loand 3.将培养基从培养皿中吸出，将病毒加人到培养皿中，37°C，5%C02,培养lh。 4.加入4〜5ml含10%胎牛血清的完全培养基，37°C，5%C〇2，孵育24〜48h。 5.吸去培养基，用PBS清洗细胞。 6.胰酶消化或是细胞刮刀刮取细胞，将细胞转人离心管。 7.1500r/min离心3min，用IOOul完全培养基或PBS重悬沉淀。 8.将细胞悬液转人白色或黑色的96孔板上，-每孔加入100ul萤光素（pH5.0),快速混匀。细胞不需被裂解。 9.在加人了萤光素酶底物后，立即用荧光计数仪测量萤光素酶的酶活性。 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-08
阅读（145）
▍
相关分类
▍
相关文章
