实验步骤 | 啮齿动物体内的病毒投递材料试剂 动物:大鼠或小鼠 BHK-21细胞 克他命 病毒储存液 根据方案1制备可表达目的基因的重组a病毒,使用前需要用〇•22um滤器过滤灭菌。 Xylazine 仪器 滤器•(无菌,0.22um,微孔) Hamilton注射器(10/m1) 注射器(不锈钢) 微型输液泵 聚乙烯管 定向设备 方法 在全身麻醉并伴有体温调节控制及氧气补充的情况下进行微注射。 1.用方案3确定病毒储存液在BHK-21细胞中的大概滴度。 2.稀释病毒,使之适用于实验条件。 对纹状体、扁桃体或脑皮层,使用IO5个病毒颗粒;对脑室,使用IO7个病毒颗粒。 3.通过每千克体重腹膜内注射200mg克他命和IOmgxylazine来麻醉实验动物。 4.根据动物调整定向设备。 5.用不锈钢注射器吸取病毒,通过聚乙烯管连接微型输液栗和IOulHamiltonsyringe。 6.以0.5ul/min的速度融合病毒溶液。 7.将针在原位多放置2min。 8.将针缓慢的拿开。 9•缝合伤口,手术后3〜4h内使动物处于温暖的环境下。 10•简单的健康检测(如体重、体温和食量等)和行为反应。 11.在注射后的不同时间点,收集组织和鉴定转基因的表达 |
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