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Short term exposure (up to 1 week cumulative) to ambient temperature possible.
Shelf Life: 12 months after date of delivery
Molecular Formula: C53H65N10O13PS2 (free acid)
Molecular Weight: 1145.25 g/mol (free acid)
Purity: ≥ 95 % (HPLC)
Form: red-violet solution in water
Concentration: 1.0 mM - 1.1 mM
pH: 7.5 ±0.5
Spectroscopic Properties: λexc 588 nm, λem 609 nm, ε 80.0 L mmol-1 cm-1 (Tris-HCl pH 7.5)
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siRNA (Small interfering RNA),是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
tRNA(转运RNA)可以转运氨基酸。
mRNA(信使RNA)是由细胞核内的DNA转录来的,相当于蛋白质的设计图纸。
翻译的过程:核糖体附着在mRNA上,然后tRNA搬运氨基酸,运往到核糖体上,从而拼合成蛋白质。
国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。
第一部分
siRNA理论知识
siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛
细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛
回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛
关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。
第二部分
siRNA的设计
siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛
siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛
回复:【共享】SiRNA序列的设计方法-蚂蚁淘论坛
请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛
第三部分
siRNA转染效率
FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛
荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛
回复:siRNA效率-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】为何siRNA转染效果不佳-蚂蚁淘论坛
回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛
关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。
第四部分
siRNA动物体内转染
RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛
这方面的新手还在看文献看帖学习阶段有个疑惑看到有的文章siRNA也会用到载体比如说pSUPERxx
Thecellsweretransientlytransfectedwith4mg(1:1)pSUPER.retroandpSilencer2.1-U6hygrovectors(vectorgroup),4mgHIF-1asiRNA-expressingplasmid(HIF-1asiRNAgroup),4mgVEGFsiRNA-expressing
plasmid(VEGFsiRNAgroup),or4mg(1:1)HIF-1asiRNA-andVEGFsiRNA-expressingplasmids(co-transfectiongroup)bytheLipofectamine2000(LF2K;Invitrogen,Carlsbad,CA)methodaccordingtothemanufacturer’sinstructions
但是我看各位前辈的说法
siRNA是化学合成的加发卡结构后shRNA才可以加载体构建质粒?然后可能在进一步构建病毒
为什么文章把siRNA插入到载体里面呢?我没理解错吧?它这种表述是不是有问题呢?
然后是构建了质粒载体之后可以再包装成病毒吗?那质粒载体可以直接用吗?
可能我表述的也不太清楚。。。希望有前辈简单回答!
tRNA的二级结构:单链内某些区域靠氢键配对形成局部双链,并折叠形成其二级结构-三叶草型结构
三级结构是在二级结构基础上进一步折叠形成,呈“倒L”型。
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。
编码线虫的氨基酰tRNA合成酶是否和编码大鼠的氨基酰tRNA合成酶的基因相同?
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