excitationandemissionspectrumofATTO488
Forresearchuseonly!
Shipping:shippedonblueice
StorageConditions:storeat-20°C
Shorttermexposure(upto1weekcumulative)toambienttemperaturepossIBLe.
ShelfLife:12monthsafterdateofdelivery
MolecularFormula:C41H47N10O15PS2(freeacid)
MolecularWeight:1014.24g/mol(freeacid)
Purity:≥95%(HPLC)
Form:yellowsolutioninwater
Concentration:1.0mM-1.1mM
pH:7.5±0.5
SpectroscopicProperties:λexc 500 nm,λem 520 nm,ε 90.0 L mmol-1 cm-1(Tris-HClpH7.5)
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
本人,大学本科生小白,想问一下各位老师,sirna设计出来之后,用snapgene吧sirna与靶mrna进行序列对比为什么没有同源序列,还有如果我想检验sirna是不是脱靶,是不是可以将sirna序列与相关影响的非靶基因序列对比确定哪。
国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。
第一部分
siRNA理论知识
siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛
细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛
回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛
关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。
第二部分
siRNA的设计
siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛
siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛
回复:【共享】SiRNA序列的设计方法-蚂蚁淘论坛
请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛
第三部分
siRNA转染效率
FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛
荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛
回复:siRNA效率-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】为何siRNA转染效果不佳-蚂蚁淘论坛
回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛
关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。
第四部分
siRNA动物体内转染
RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛
siRNA:Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
siRNA有如下特点:
1. 长度约在22nt左右。
2. 依赖Dicer酶的加工,是Dicer的产物,所以具有Dicer产物的特点。
3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。
4. 是RISC组分。
5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。
6. siRNA一般是人工体外合成的,通过转染进入人体内,是RNA干涉的中间产物;植物体内也存在内源的siRNA。
7. 结构上, siRNA是双链RNA。
8. 在Dicer酶的加工过程中, siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。
9. 在作用位置上, siRNA可作用于mRNA的任何部位,并与mRNA完全互补。
10. 在作用方式上, siRNA只能导致靶标基因的降解,即为转录水平后调控。
11. siRNA不参与生物生长,是RNAi的产物,原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。
n.[医] (对伤处等的) 针探,探查; [医] 探针,取样器; 探测仪;探头;
vt.探索,调查; 用探针(或探测器等)探查,探测;
vt.盘问; (用试探性袭击等)侦察(敌情) ; 用尖物刺穿(物件); 用力使向前推进;
The more they probed into his background, the more inflamed their suspicions would become
他们越调查他的背景,疑团就越多。
tRNA的功能:主要是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序(见蛋白质的生物合成、核糖体)。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中,第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫起始tRNA,其余tRNA参与肽链延伸,称为延伸tRNA,按照mRNA上密码的排列,携带特定氨基酸的tRNA依次进入核糖体。形成肽链后,tRNA即从核糖体释放出来。整个过程叫做tRNA循环(图3)。tRNA靠反密码子与mRNA识别,但并非一种反密码子只能识别一种密码子。例如反密码子CIG(I是次黄嘌呤核苷酸)能识别三种密码子。一般反密码子中的稀有核苷酸因配对不严格而能识别多种密码子,这种现象在生物学中称为“摆动性”tRNA是通过分子中3′端的CCA携带氨基酸的。氨基酸连接在腺苷酸的2′或3′OH基上,携带了氨基酸的tRNA叫氨酰tRNA,例如,携带甘氨酸的tRNA叫甘氨酰tRNA。氨基酸与tRNA的结合由氨酰tRNA合成酶催化,分二步进行:①氨基酸+ATP→氨酰-AMP+焦磷酸;②氨酰-AMP+tRNA→氨酰-tRNA+AMP。与一种氨基酸对应的至少有一种tRNA和一种氨酰-tRNA合成酶(见蛋白质生物合成)。tRNA还具有其他一些特异功能,例如,在没有核糖体或其他核酸分子参与下,携带氨基酸转移至专一的受体分子,以合成细胞膜或细胞壁组分;作为反转录酶引物参与DNA合成;作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。在许多植物病毒RNA分子中发现有类似于tRNA的三叶草结构,有的也能接受氨基酸,其功能不详。向左转|向右转
二:主要功能:①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。
PNA是一种人工合成的核酸的类似物,与核酸相似,它也是由携带ATGC四种碱基的四种单体首尾相连所构成的链状结构,从而保证这种物质能够像核酸一样靠碱基堆积力形成Watson-Crick碱基对,与DNA、RNA形成杂交分子PNA/DNA或PNA/RNA这就是PNA作为杂交探针的理论基础。所不同的是构成PNA骨架的单体不是通常的带负电的磷酸核糖而是N-(2-氨已基)-甘氨酸,单体之间靠酰胺键连接成长链。这种电中性的骨架结构赋予肽核酸探针优良的杂交特性。
首先PNA/DNA杂交分子的性质很稳定,从化学动力学角度看,PNA/DNA的结合常数有明显提高,一旦形成了双链,即使加入上百倍的寡核苷酸也不能使它解离。据报道,对于含有高度反向重复序列的超螺旋DNA,PNA/DNA杂交分子比DNA/DNA双链的结合常数提高了五万倍;从热力学角度看,PNA/DNA杂交分子的Tm也高于相同序列的DNA/DNA双链,通常,在100mmol/L的NaCl溶液中,PNA/DNA杂合子与相应的DNA/DNA双链相比,每个碱基对的Tm值要高出1℃。也就是说,15个碱基对的PNA/DNA平均Tm值约为70℃,比同样的DNA/DNA要高出15℃。从而使检测过程中的灵敏度大为提高。此外,中性骨架还使PNA与DNA的杂交摆脱了对杂交液盐度的依赖,这一重要性质不仅意味着杂交过程中省去了提高盐浓度的操作,更有意义的是,只要保证杂交体系足够低的离子强度,就能抑制非特异性的杂交和靶DNA序列的自身复性对灵敏度的损害。
不但如此,这种高度的灵敏度并没有像其他种类的探针一样引起特异性的下降,相反它对于碱基错配的容纳力更小。在16bp的PNA/DNA杂合子中,一个碱基的错配会导致Tm值下降15℃,而对于同样的DNA双链,Tm值只下降11℃
原文地址:http://tahepna.com/file_news_read.asp?id=59&class=%D1%D0%BE%BF%BD%F8%D5%B9&fo=4&flag=
探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。
基因探针,即核酸探针,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是单链,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因,也可以仅仅是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。
进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的克隆,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。
为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。
的问题在于使siRNA导入细胞,
将sirna导入细胞内常见的方法是
将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs。
或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞。
此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达。
暂无品牌问答